Pipetty Pro電動移液器在蛋白質含量測定（考馬斯亮藍法）中的應用

方案摘要：為提升試驗效率本方案引入了 Pipetty Pro 非等量電動移液器優(yōu)化實驗流程。利用其核心非等量移液功能，可精準完成對照品溶液 0.01-0.1mL 梯度體積移取，無需反復調整量程，減少操作步驟與誤差累積。該移液器 75g 輕量化設計適配長時間操作，溫度自動補償技術可校正手熱導致的體積偏差，且能精準移取酸性染色液等試劑。通過提升移液準確性與效率，有效優(yōu)化標準曲線線性相關性，確保供試品蛋白質濃度計算可靠，尤其適用于批量樣品的微量精準測定。
 
方案詳情：
一、實驗原理在酸性溶液中考馬斯亮藍G250與蛋白質分子中的堿性氨基酸（精氨酸）和芳香族氨基酸結合形成藍色復合物，在一定范圍內其顏色深淺與蛋白質濃度呈正比，以蛋白質對照品溶液作標準曲線，采用比色法測定供試品中蛋白質的含量。靈敏度高，通常可測定1～200μg的蛋白質量。
 
二、‌實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC12-01-250；
② 玻璃比色皿；
③ 玻璃試管；
④ 紫外-可見分光光度計。
 
2、試劑和材料
① 酸性染色液；
② 對照品溶液；
③ 供試品溶液。
 
三、實驗步驟
1、使用Pipetty Pro非等量電動移液器，在小程序上提前預設好每次分液的體積，一次吸取對照品溶液，依次加：0.0mL（空白管）、0.01mL、0.02mL、0.04mL、0.06mL、0.08mL、0.1mL到具塞試管內。
 
2、所有試管均加水至 0.1mL，保證最終體積一致。
3、每管再加入酸性染色液 5.0mL，加入后需立即混勻。
4、測定波長固定為595nm，立即測定吸光度。并以 0 號管作為空白對照，用于扣除背景干擾。
5、以 “對照品溶液的實際濃度” 為橫坐標（x） ，以 “對應測得的吸光度” 為縱坐標（y） ，使用統(tǒng)計工具計算線性回歸方程。
注：對照品溶液的實際濃度 = 對照品原液濃度 × 取樣體積÷ 最終總容積。
6、根據(jù)對照品溶液的濃度，使用Pipetty Pro精密量取 “適量供試品溶液”，取樣量需使測得的吸光度落在對照品線性范圍內，重復上述 “加水定容→加染色液→測吸光度” 的操作。
 
四、結果計算
將供試品的吸光度代入線性回歸方程，計算出 “供試品溶液的測定濃度”。
最終蛋白質含量 = 測定濃度 × 供試品的稀釋倍數(shù)