Pipetty電動移液器在蛋白質含量測定（福林酚法2）中的應用

方案摘要：本方案采用福林酚法測定蛋白質含量，核心通過對照品建立線性關系計算供試品濃度，利用 Pipetty 電動移液器提升實驗精準度與效率。實驗中需精密量取去氧膽酸鈉、福林酚試液等多規格試劑，Pipetty 憑借精度高，量程廣，連續分液一致性強的優勢，確保量取誤差最小化。其獨家溫度控制功能可自動補償手部熱量導致的分液偏差。連續分液模式大幅提升多管對照品處理效率，適配通用吸頭降低操作成本。最終通過精準移液保障吸光度數據可靠，為線性回歸及含量計算提供堅實支撐。
 
方案詳情：
一、實驗原理
     核心原理是蛋白質與顯色劑的特異性反應及吸光度與濃度的線性關系。首先，去氧膽酸鈉輔助蛋白質溶解，72% 三氯醋酸通過變性作用使蛋白質沉淀，實現與雜質分離；沉淀用試液 C 復溶后，蛋白質肽鍵先與試液中成分反應，再與福林酚試液（含磷鉬酸 - 磷鎢酸）作用，生成藍色復合物。該復合物在 750nm 波長下的吸光度，與蛋白質濃度呈正比。通過對照品溶液建立濃度 - 吸光度線性回歸方程，代入供試品吸光度，即可計算其濃度，再乘以稀釋倍數，得到最終蛋白質含量。
 
二、‌實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC01-03-1000、MSIC90-001-10mL；
② 紫外-可見分光光度計；
③ 玻璃試管；
④ 臺式離心機；
⑤ 渦旋振蕩器。
 
2、試劑和材料
① 蛋白質對照品溶液；
② 福林酚試液；
③ 試液C；
④ 去氧膽酸鈉試液；
⑤ 72% 三氯醋酸溶液；
 
三、實驗步驟
1、使用Pipetty電動移液器，精密量取各濃度對照品溶液 1.0mL，分別移入玻璃試管中。
 
2、設置連續分液模式，每管加入去氧膽酸鈉試液 0.1mL，渦旋混勻后，室溫放置 10 分鐘。
 
3、加入72% 三氯醋酸溶液 0.1mL，渦旋混勻，在3000g 條件下離心 30 分鐘。
4、輕輕倒出上清液，用吸管徹底移除剩余液體，保留蛋白質沉淀。
5、向沉淀中加入試液 C 1mL復溶，溶解后再加入試液 C 5mL，混勻，室溫放置 10 分鐘。
6、加入福林酚試液 0.5mL，立即混勻，室溫放置 30 分鐘。
7、照紫外 - 可見分光光度法，在750nm 波長處測定吸光度，同時以 “0 號管”（不含對照品的空白體系）作為空白校正。
8、以對照品溶液濃度為橫坐標（X）、對應吸光度為縱坐標（Y），計算線性回歸方程（Y = aX + b）。　　
 
四、結果判定
1、精密量取供試品溶液 1.0mL，完全重復上述對照品的步驟 ，測定其吸光度。
2、將供試品吸光度代入對照品的線性回歸方程，計算出供試品溶液中的蛋白質濃度。
3、用計算得到的濃度乘以供試品的稀釋倍數，即為供試品中蛋白質的實際含量。