Moxi GO II 快速流式細(xì)胞儀為單細(xì)胞測序的樣本質(zhì)控建立新標(biāo)準(zhǔn)

Moxi GO II：為單細(xì)胞測序的樣本質(zhì)控建立新標(biāo)準(zhǔn)
——基于庫爾特-熒光雙模技術(shù)的快速流式解決方案
 

在單細(xì)胞測序技術(shù)爆發(fā)式發(fā)展的今天，研究者們正以前所未有的分辨率探索細(xì)胞異質(zhì)性，解密生命的微觀奧秘。然而，這項(xiàng)被譽(yù)為“生命科學(xué)顯微鏡”的技術(shù)，卻長期受困于樣本制備的“第一道關(guān)卡”——如何精準(zhǔn)把控細(xì)胞濃度、活率、純度等關(guān)鍵參數(shù)。美國Orflo Technologies的快速流式細(xì)胞儀Moxi GO II（圖1），以庫爾特-熒光雙模技術(shù)重構(gòu)單細(xì)胞測序質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，成為科研路上的“可靠同行者”。
 

圖1 Moxi GO II

單細(xì)胞測序的“隱形門檻”，Moxi GO II輕松跨越

單細(xì)胞測序的魅力在于捕捉單個(gè)細(xì)胞的獨(dú)特基因表達(dá)圖譜，但樣本的微小性（單個(gè)細(xì)胞RNA易降解）、復(fù)雜性（細(xì)胞異質(zhì)性）和敏感性（批次效應(yīng)影響大），讓樣本制備成為決定實(shí)驗(yàn)成敗的“生死線”。傳統(tǒng)檢測方法或依賴成像計(jì)數(shù)（僅測幾百個(gè)細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)偏差大），或受激光散射影響（粒徑測量失真），難以滿足單細(xì)胞測序?qū)?ldquo;高精度”的嚴(yán)苛要求。

Moxi GO II的出現(xiàn)，為這一困境帶來了突破性解決方案。它創(chuàng)新性融合庫爾特原理與熒光流式檢測技術(shù)，從根本上革新了細(xì)胞分析邏輯：

圖2 庫爾特原理圖解

 

圖3 熒光檢測圖解

從樣本到數(shù)據(jù)，Moxi GO II的“全鏈條守護(hù)”

單細(xì)胞測序的樣本制備涉及細(xì)胞分離、純化、質(zhì)控等多個(gè)環(huán)節(jié)，Moxi GO II以“多面手”能力覆蓋全程，成為科研人員的“質(zhì)控管家”：

在單細(xì)胞測序中，細(xì)胞濃度過高易導(dǎo)致油滴包裹多個(gè)細(xì)胞，過低則浪費(fèi)試劑——Moxi GO II幾秒鐘內(nèi)即可完成精準(zhǔn)計(jì)數(shù)，CV值低于傳統(tǒng)系統(tǒng)（如圖4所示，計(jì)數(shù)CV值極低，準(zhǔn)確性遠(yuǎn)高于成像系統(tǒng)和血球計(jì)數(shù)板），確保每個(gè)油滴只捕獲一個(gè)細(xì)胞。同時(shí)，其活率檢測能精準(zhǔn)區(qū)分死活細(xì)胞，避免死細(xì)胞釋放的游離核酸干擾測序結(jié)果。

圖4 不同檢測系統(tǒng)的計(jì)數(shù)和活率檢測CV值

 

細(xì)胞聚集、碎片污染是單細(xì)胞測序的常見隱患。Moxi GO II的超高分辨率粒徑分析（可區(qū)分4.1μm、6μm、7.9μm等不同微珠），能清晰識別聚集細(xì)胞（如圖5中HEK-293細(xì)胞聚集狀態(tài)）和小顆粒碎片（如圖6中“不健康”細(xì)胞的小顆粒增加），幫助研究者在實(shí)驗(yàn)早期剔除不合格樣本。
 

圖5 聚集和非聚集樣本結(jié)果疊加比較

圖6 健康和不健康樣本結(jié)果疊加比較

 

無論是PBMC樣本中的紅細(xì)胞污染（圖7中通過粒徑門控計(jì)算RBC“污染”程度），還是磁珠純化后的細(xì)胞純度驗(yàn)證（圖8中單核細(xì)胞與PBMC的粒徑差異），Moxi GO II都能通過粒徑+熒光雙維度分析輕松完成。更支持細(xì)胞表型分析（如CD3/CD8雙標(biāo)記檢測，圖9），為分選后純度驗(yàn)證提供直接證據(jù)。

圖7 PBMC純度，RBC污染

圖8磁珠純化

圖9 細(xì)胞表型分析

 

當(dāng)樣本為細(xì)胞核（直徑僅4-9μm）時(shí)，傳統(tǒng)成像計(jì)數(shù)儀常因分辨率不足誤判，而Moxi GO II可分辨低至3μm的顆粒，結(jié)合PI染色輕松實(shí)現(xiàn)細(xì)胞核精準(zhǔn)計(jì)數(shù)（圖10中裂解前后細(xì)胞核計(jì)數(shù)一致），為核測序提供可靠數(shù)據(jù)。

圖10 細(xì)胞核計(jì)數(shù)
 

 

Moxi GO II的準(zhǔn)確性、可靠性等已被眾多頂級科研團(tuán)隊(duì)驗(yàn)證，成為單細(xì)胞測序研究的有力工具： 

不止于“精準(zhǔn)”，更在于“易用”：讓每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都能輕松駕馭

對于忙碌的科研人員而言，儀器的“友好度”同樣關(guān)鍵。Moxi GO II設(shè)計(jì)之初便以“化繁為簡”為目標(biāo)：  

總結(jié)：

單細(xì)胞測序技術(shù)獨(dú)特復(fù)雜，成本昂貴，因此樣本處理制備就顯得尤為重要，是下游實(shí)驗(yàn)成敗的基礎(chǔ)。Orflo Technologies的Moxi GO II系統(tǒng)非常適用于細(xì)胞樣本的全程監(jiān)測。 Moxi GO II采用庫爾特原理進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和粒徑測量，同時(shí)采用488nm激光光源，結(jié)合兩個(gè)PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根據(jù)需要更換），進(jìn)行細(xì)胞活率、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)染效率、活性氧簇、線粒體膜電位等常規(guī)流式檢測。

儀器設(shè)計(jì)小巧輕便，無需預(yù)熱，開機(jī)即用，預(yù)設(shè)程序，觸屏操控，運(yùn)行后10秒即可給出測試結(jié)果，使用后也無需清潔維護(hù)。Moxi GO II功能多樣，簡單易用，為廣大研究者提供了一個(gè)非常實(shí)用的檢測工具。通過Moxi GO II，無論是經(jīng)驗(yàn)豐富的流式專家，還是初試身手的實(shí)驗(yàn)小白，都可以輕松完成實(shí)驗(yàn)。

美國Orflo Technologies公司是一家非常專業(yè)的細(xì)胞分析儀器研發(fā)和制造企業(yè)，擁有多項(xiàng)專利技術(shù)，產(chǎn)品以庫爾特原理的高精細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和超快流式細(xì)胞儀為主。作為中國地區(qū)獨(dú)家代理，環(huán)亞生物科技有限公司全權(quán)負(fù)責(zé)Orflo Technologies產(chǎn)品在中國地區(qū)的推廣、銷售，為廣大用戶提供專業(yè)的技術(shù)咨詢和產(chǎn)品服務(wù)。

環(huán)亞生物，生命科學(xué)產(chǎn)品全國性代理商，不斷把國外頂級的創(chuàng)新產(chǎn)品引入中國。環(huán)亞生物具備完善的公司運(yùn)營、產(chǎn)品管理、營銷、售前技術(shù)支持和售后維修體系。

文中所用文獻(xiàn)全文鏈接：
1.https://doi.org/10.1093/procel/pwac058
2.https://doi.org/10.1093/procel/pwac062
3.https://doi.org/10.1101/2023.06.09.544380
4.https://doi.org/10.1016/j.devcel.2020.11.002

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