組織解離液的原理、標(biāo)準(zhǔn)操作流程及使用技巧

實(shí)驗(yàn)室里，一小塊肝組織在透明液體的作用下，30分鐘內(nèi)分散成數(shù)以萬計(jì)的活性細(xì)胞，等待科研人員探索生命奧秘。

在細(xì)胞生物學(xué)研究中，組織解離液作為一種由多種生物酶組成的混合物，正成為實(shí)驗(yàn)室不可或缺的工具。它能夠溫和、快速、高效地將組織中的結(jié)締組織酶解并釋放出細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。

無論是大腦、心臟、脾臟、肝臟、腎臟、胰腺、腸胃、膽囊，還是各類腫瘤組織，這種多功能的解離液都能應(yīng)對自如，為后續(xù)研究提供高活性的細(xì)胞樣本。

膠原酶、分散酶、彈性蛋白酶和透明質(zhì)酸酶等協(xié)同作用，就像一支配合默契的團(tuán)隊(duì)，分別負(fù)責(zé)分解膠原蛋白、纖維連接素、彈性蛋白和透明質(zhì)酸，從而溫和地解除細(xì)胞間的連接。

這種多酶協(xié)同系統(tǒng)避免了單一酶消化不徹底或?qū)��?xì)胞損傷大的問題，確保在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量高活性的完整細(xì)胞，同時(shí)保留重要的細(xì)胞表面抗原。

在常規(guī)組織處理方面，它適用于脾臟、肝臟、腎臟、胰腺等多種人源和動物源組織。

特別值得關(guān)注的是，對于結(jié)構(gòu)復(fù)雜的腫瘤組織，組織解離液同樣表現(xiàn)出色。腫瘤組織通常含有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)，結(jié)構(gòu)緊密，傳統(tǒng)方法難以獲得高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液，而專門設(shè)計(jì)的組織解離液能夠有效解決這一難題。

在細(xì)胞分選領(lǐng)域，解離液保存細(xì)胞表面抗原的特點(diǎn)，確保了免疫細(xì)胞化學(xué)染色或流式細(xì)胞術(shù)分選的準(zhǔn)確性，為免疫學(xué)研究提供了可靠基礎(chǔ)。

在藥物篩選領(lǐng)域，通過解離液獲得的原代細(xì)胞對藥物反應(yīng)更接近體內(nèi)真實(shí)情況，大大提高了篩選結(jié)果的臨床預(yù)測價(jià)值。

類器官構(gòu)建是近年來的研究熱點(diǎn)，組織解離液為這一領(lǐng)域提供了基礎(chǔ)——將組織消化成適合3D培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán)塊或單細(xì)胞。

• 試劑：組織解離液、細(xì)胞培養(yǎng)基、紅細(xì)胞裂解液（可選）
• 耗材：離心管、一次性無菌過濾器（70μm）
• 器械：眼科剪、眼科鑷
• 儀器：恒溫?fù)u床、離心機(jī)

1. 組織預(yù)處理：取約100mg新鮮組織至無菌離心管中，用眼科剪將組織徹底剪碎至1-2mm³小塊。
2. 解離反應(yīng)：加入1mL組織解離液，將離心管置于恒溫?fù)u床上，37℃、180rpm震蕩孵育。不同組織消化時(shí)間有所不同（10-60分鐘），需根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
3. 細(xì)胞收集：孵育結(jié)束后，將組織勻漿用70μm無菌過濾器過濾，用細(xì)胞培養(yǎng)基沖洗過濾器，收集濾液。
4. 細(xì)胞清洗：將細(xì)胞懸液1200rpm離心5分鐘，棄上清；重復(fù)清洗一次。
5. 細(xì)胞重懸：用細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，取少量觀察消化情況。

組織剪碎程度直接影響解離效率。組織塊越小，與解離液的接觸面積越大，消化效果越好。理想大小為1-2mm³，需使用鋒利的眼科剪刀操作。

解離液用量需適中，通常1mL解離液處理100mg組織。過量會增加成本且可能對細(xì)胞造成機(jī)械損傷，不足則導(dǎo)致解離不徹底。

溫度控制至關(guān)重要。酶反應(yīng)在37℃時(shí)效率最高，因此推薦在恒溫?fù)u床中進(jìn)行解離。

無菌操作是保證后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。若細(xì)胞將用于培養(yǎng)，所有步驟都應(yīng)在生物安全柜或超凈工作臺中完成。

• 傳統(tǒng)酶消化法（如膠原酶、胰蛋白酶）：價(jià)格較低，但需要根據(jù)不同組織類型調(diào)整酶配方，操作復(fù)雜，效果不穩(wěn)定。
• 自動化組織解離儀：可一次處理8個(gè)樣品，自動化程度高，結(jié)果一致性好，但設(shè)備投資較大。
• 通用型組織解離液：兼顧了經(jīng)濟(jì)性和便利性，適合處理多種組織類型，無需頻繁更換試劑，特別適合多組織類型的研究實(shí)驗(yàn)室。

隨著單細(xì)胞測序、類器官培養(yǎng)等前沿技術(shù)的蓬勃發(fā)展，組織解離液的價(jià)值愈發(fā)凸顯。它不再僅僅是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的一個(gè)步驟，而是連接宏觀組織與微觀細(xì)胞世界的重要橋梁。
未來，隨著組織解離技術(shù)的進(jìn)一步精細(xì)化與標(biāo)準(zhǔn)化，我們有理由相信，更多生命的奧秘將通過這支小小的解離液被一一揭開。
無論你是細(xì)胞生物學(xué)的新手還是資深研究者，掌握組織解離液的使用，都意味著你掌握了開啟細(xì)胞大門的鑰匙。

【免責(zé)聲明】本篇文章來源于網(wǎng)絡(luò)公開信息，由AI生成，若不慎涉嫌侵權(quán)，請及時(shí)聯(lián)系，我們將第一時(shí)間配合處理，不承擔(dān)任何法律責(zé)任。