細胞染色緩沖液的組成、工作原理、操作、類型及應用
實驗臺上，那瓶清澈的液體看似普通，卻是解鎖細胞內部奧秘的神奇鑰匙。
在流式細胞術的實驗世界中，細胞染色緩沖液是那些常常被忽視卻至關重要的試劑之一。它不像熒光抗體那樣耀眼，也不像流式細胞儀那樣高科技，但它確實是決定實驗成敗的無聲基石。
當研究人員沉浸在流式細胞術數據的海洋中，試圖解析細胞表面標記物、細胞內因子或轉錄因子時，細胞染色緩沖液提供了保持這些細胞成分完整性和可檢測性的穩定環境。
01 產品定義與基本組成細胞染色緩沖液，也稱為流式細胞染色液，是一種經過特殊優化的緩沖鹽溶液。
它在流式細胞術中扮演著多重角色：既可作為抗體和細胞的稀釋液，又可用于細胞表面標記染色以及流式細胞分析的所有洗滌步驟。
這種緩沖液的核心組成通常包含緩沖鹽、蛋白質載體和防腐劑。緩沖鹽負責維持適宜的pH環境；蛋白質載體（如BSA或胎牛血清）則用于減少抗體和熒光素對靶細胞的非特異性結合。
此外，緩沖液中的BSA還能減少離心過程中細胞之間的剪切力，起到保護細胞的作用，確保細胞在染色過程中保持完整性和活性。
有些細胞染色緩沖液還會添加EDTA，通過螯合金屬陽離子來減少細胞間的粘連，提高細胞懸液中單個細胞的比率，這對于獲得準確的流式細胞分析結果至關重要。
02 獨特特性與工作原理細胞染色緩沖液之所以成為流式細胞術不可或缺的試劑，源于其一系列經過優化的特性。
它展現出低非特異性染色的特點，這主要歸功于緩沖液中含有的BSA作為蛋白質載體，能有效減少免疫染色過程中抗體及熒光試劑對靶細胞的非特異性結合。
同時，這種緩沖液具有出色的兼容性。使其既能兼容直接的常規染色和免疫染色，也能兼容基于生物素/親和素的間接免疫染色。
細胞染色緩沖液多為即用型溶液，無需稀釋即可直接使用，大大提高了實驗的便捷性和效率。
值得一提的是，標準的細胞染色緩沖液不含任何細胞膜通透劑或去垢劑，這一特性使其特別適用于細胞表面標記的染色，同時確保了在需要進行細胞內染色時，可與其他專用破膜緩沖液配合使用。
03 多樣化應用場景細胞染色緩沖液在流式細胞術的多個環節中發揮著關鍵作用，其應用場景頗為廣泛。
細胞表面標記染色
在細胞表面抗原分析中，細胞染色緩沖液是必不可少的試劑。它用于制備單細胞懸液，稀釋熒光標記抗體，以及在各個染色步驟間進行細胞洗滌。
具體操作包括：制備單細胞懸液后，用緩沖液洗滌細胞；用相同緩沖液重懸細胞并調整細胞密度；按抗體說明書進行免疫熒光染色；最后用緩沖液進行最終洗滌并重懸細胞用于流式細胞儀分析。
與胞內染色技術聯用當實驗涉及細胞內蛋白檢測時，細胞染色緩沖液需與其他專用試劑配合使用。
例如，細胞固定透化試劑盒（abs9936）設計用于細胞內染色和流式細胞術分析，第一步用固定緩沖液固定活細胞，第二步使用破膜緩沖液在膜上造孔，使抗體能進入細胞內部。
在此過程中，細胞染色緩沖液用于破膜后的最終洗滌步驟和細胞重懸。
死細胞鑒別染色細胞染色緩沖液也常用于區分活細胞和死細胞的染色過程。
例如，在PI染色液（abs9358）的使用方案中，細胞染色緩沖液用于制備細胞懸液，并在PI染色后用于洗滌和重懸細胞。
不過需要注意，某些死細胞染色劑（如PI）與細胞內免疫染色步驟不兼容，此時需要使用可兼容固定步驟的胺反應性染料。
多重細胞功能分析在更復雜的實驗設計中，細胞染色緩沖液支持包括細胞周期、細胞凋亡、細胞因子分泌等多種細胞功能的分析。
它作為基礎試劑，與各種檢測試劑盒配合使用，如Annexin V凋亡檢測試劑盒、EdU細胞增殖檢測試劑盒等。
04 實驗操作指南要充分發揮細胞染色緩沖液的性能，正確的實驗操作至關重要。以下是典型的使用流程：
- 樣本制備：首先將待分析的樣本制備成單細胞懸液，300-500×g離心5分鐘，棄去上清。對于組織樣本，可能需要使用特定的分離試劑盒。
- 細胞染色：用適量的細胞染色緩沖液重懸細胞沉淀，通常調整細胞密度至10⁷個/mL。按實驗設計加入表面抗體，避光孵育。
- 洗滌步驟：染色完成后，加入細胞染色緩沖液洗滌細胞，4°C，350×g離心5分鐘，棄上清。重復此步驟1-2次以去除未結合的抗體。
- 細胞固定：如果僅進行表面染色，可直接進行下一步；如需進行細胞內染色，此時使用固定液固定細胞。
- 胞內染色：固定后的細胞用破膜緩沖液（如含Triton X-100或皂素的緩沖液）處理，然后在破膜緩沖液存在的條件下進行細胞內抗原的染色。
- 最終處理：染色完成后，用細胞染色緩沖液進行最終洗滌，然后重懸于200-500μL緩沖液中，準備上機分析。
05 不同類型緩沖液的區分與選擇
面對不同的實驗需求，選擇合適的緩沖液類型至關重要。以下是主要緩沖液類型的比較：
| 緩沖液類型 | 主要功能 | 主要成分 | 適用實驗 | 使用注意事項 |
|---|---|---|---|---|
| 細胞染色緩沖液 | 稀釋抗體、洗滌細胞、維持細胞活性 | BSA、緩沖鹽、可能的防腐劑如疊氮鈉 | 細胞表面標記染色、細胞稀釋 | 不含通透劑，不適用于細胞內染色單獨使用 |
| 固定破膜緩沖液 | 固定細胞結構、破壞細胞膜通透性 | 交聯劑（固定）、去垢劑（破膜） | 細胞內細胞因子、細胞質蛋白檢測 | 不建議用于核內染色 |
| 透化緩沖液 | 在固定細胞上造孔 | 去垢劑（Triton X-100、皂素）、Tris-HCl、NaCl | 細胞內抗原檢測、免疫分型 | 需優化透化條件（時間、溫度） |
| 轉錄因子破膜緩沖液 | 核內抗原檢測 | 特殊配方穿透核膜 | 轉錄因子（如Foxp3）檢測 | 與常規胞內染色不同的操作流程 |
對于一些特殊應用，還有更具針對性的緩沖液可供選擇。CellBlox™封閉緩沖液是一種非抗體、非蛋白的封閉溶液，專門用于阻斷熒光染料與細胞的非特異性結合，可顯著降低背景熒光。
它在使用含菁染料或含菁的串聯染料時特別有用，能有效阻斷與單核細胞和巨噬細胞的非特異性相互作用。
傳統緩沖液的應用：傳統的磷酸鹽緩沖液（PBS）雖用途廣泛，但在專業流式細胞術中通常不足以替代專用的細胞染色緩沖液。
PBS可用于免疫熒光染色中的細胞洗滌，以及各種Romanowsky型染色流程，但它缺乏減少非特異性結合所需的蛋白質載體和保護細胞的成分。
06 選擇與使用要點選擇合適的細胞染色緩沖液并正確使用它，對實驗成功至關重要。以下是一些實用建議：
- 根據實驗目標選擇：對于單純的細胞表面標記分析，基本的細胞染色緩沖液就足夠了。如果實驗涉及細胞內或核內抗原檢測，則需要搭配相應的固定破膜試劑。
- 注意緩沖液成分：如果后續實驗涉及細胞培養，需注意緩沖液中是否含有疊氮鈉等對細胞有毒的成分。有些緩沖液含有EDTA，能減少細胞粘連，但可能影響某些依賴二價陽離子的細胞過程。
- 嚴格保存條件：大多數細胞染色緩沖液建議4°C保存，一年有效。長期不使用可置于-20°C，以延長保存時間。使用時盡量減少敞口時間，避免微生物污染。
- 配合Fc受體阻斷劑：當使用某些物種的細胞（尤其是小鼠、人）時，考慮同時使用Fc受體阻斷劑，進一步減少非特異性結合。
- 優化實驗條件：雖然細胞染色緩沖液提供了基礎環境，但具體實驗條件（如抗體濃度、孵育時間溫度）仍需根據細胞類型和抗體特性進行優化。
經過一番詳盡的介紹，回望實驗室中那瓶細胞染色緩沖液，它的價值已不言而喻。它不像高科技儀器那樣引人注目，卻是連接實驗設計與準確數據的關鍵橋梁。無論是細胞免疫學研究、癌癥生物學探索，還是藥物開發評估，細胞染色緩沖液都默默地支撐著這些前沿科學工作的可靠性與重復性。在科學的宏大圖景中，正是像細胞染色緩沖液這樣的基礎試劑，構成了探索未知的堅實基石。
| 貨號 | 產品名稱 | 規格 |
|---|---|---|
| abs9475 | 細胞染色緩沖液 | 500mL |
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