組織解離液的原理、標準操作流程及使用技巧

實驗室里，一小塊肝組織在透明液體的作用下，30分鐘內分散成數以萬計的活性細胞，等待科研人員探索生命奧秘。

在細胞生物學研究中，組織解離液作為一種由多種生物酶組成的混合物，正成為實驗室不可或缺的工具。它能夠溫和、快速、高效地將組織中的結締組織酶解并釋放出細胞，形成細胞懸液。

無論是大腦、心臟、脾臟、肝臟、腎臟、胰腺、腸胃、膽囊，還是各類腫瘤組織，這種多功能的解離液都能應對自如，為后續研究提供高活性的細胞樣本。

膠原酶、分散酶、彈性蛋白酶和透明質酸酶等協同作用，就像一支配合默契的團隊，分別負責分解膠原蛋白、纖維連接素、彈性蛋白和透明質酸，從而溫和地解除細胞間的連接。

這種多酶協同系統避免了單一酶消化不徹底或對細胞損傷大的問題，確保在較短時間內獲得大量高活性的完整細胞，同時保留重要的細胞表面抗原。

在常規組織處理方面，它適用于脾臟、肝臟、腎臟、胰腺等多種人源和動物源組織。

特別值得關注的是，對于結構復雜的腫瘤組織，組織解離液同樣表現出色。腫瘤組織通常含有豐富的細胞外基質，結構緊密，傳統方法難以獲得高質量的單細胞懸液，而專門設計的組織解離液能夠有效解決這一難題。

在細胞分選領域，解離液保存細胞表面抗原的特點，確保了免疫細胞化學染色或流式細胞術分選的準確性，為免疫學研究提供了可靠基礎。

在藥物篩選領域，通過解離液獲得的原代細胞對藥物反應更接近體內真實情況，大大提高了篩選結果的臨床預測價值。

類器官構建是近年來的研究熱點，組織解離液為這一領域提供了基礎——將組織消化成適合3D培養的細胞團塊或單細胞。

• 試劑：組織解離液、細胞培養基、紅細胞裂解液（可選）
• 耗材：離心管、一次性無菌過濾器（70μm）
• 器械：眼科剪、眼科鑷
• 儀器：恒溫搖床、離心機

1. 組織預處理：取約100mg新鮮組織至無菌離心管中，用眼科剪將組織徹底剪碎至1-2mm³小塊。
2. 解離反應：加入1mL組織解離液，將離心管置于恒溫搖床上，37℃、180rpm震蕩孵育。不同組織消化時間有所不同（10-60分鐘），需根據實際情況調整。
3. 細胞收集：孵育結束后，將組織勻漿用70μm無菌過濾器過濾，用細胞培養基沖洗過濾器，收集濾液。
4. 細胞清洗：將細胞懸液1200rpm離心5分鐘，棄上清；重復清洗一次。
5. 細胞重懸：用細胞培養基重懸細胞，取少量觀察消化情況。

組織剪碎程度直接影響解離效率。組織塊越小，與解離液的接觸面積越大，消化效果越好。理想大小為1-2mm³，需使用鋒利的眼科剪刀操作。

解離液用量需適中，通常1mL解離液處理100mg組織。過量會增加成本且可能對細胞造成機械損傷，不足則導致解離不徹底。

溫度控制至關重要。酶反應在37℃時效率最高，因此推薦在恒溫搖床中進行解離。

無菌操作是保證后續細胞培養成功的關鍵。若細胞將用于培養，所有步驟都應在生物安全柜或超凈工作臺中完成。

• 傳統酶消化法（如膠原酶、胰蛋白酶）：價格較低，但需要根據不同組織類型調整酶配方，操作復雜，效果不穩定。
• 自動化組織解離儀：可一次處理8個樣品，自動化程度高，結果一致性好，但設備投資較大。
• 通用型組織解離液：兼顧了經濟性和便利性，適合處理多種組織類型，無需頻繁更換試劑，特別適合多組織類型的研究實驗室。

隨著單細胞測序、類器官培養等前沿技術的蓬勃發展，組織解離液的價值愈發凸顯。它不再僅僅是實驗準備的一個步驟，而是連接宏觀組織與微觀細胞世界的重要橋梁。
未來，隨著組織解離技術的進一步精細化與標準化，我們有理由相信，更多生命的奧秘將通過這支小小的解離液被一一揭開。
無論你是細胞生物學的新手還是資深研究者，掌握組織解離液的使用，都意味著你掌握了開啟細胞大門的鑰匙。

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