實(shí)驗(yàn)研究：慢病毒感染RAW264.7細(xì)胞的一般MOI值

非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是肺癌中最常見的類型，預(yù)后較差且轉(zhuǎn)移率高，其轉(zhuǎn)移過程涉及復(fù)雜機(jī)制，包括腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）分泌的趨化因子。現(xiàn)有靶向趨化因子的策略如單克隆抗體、小分子抑制劑等存在腫瘤靶向性差、生物相容性低的問題。2025年11月，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院張凱、黃帥、徐建南聯(lián)合中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院吉喆研究團(tuán)隊(duì)在Materials Today Bio (IF 10.2)發(fā)表題為“Targeting chemokine-driven metastasis in non-small cell lung cancer: Development and evaluation of chemokine nanosponges for therapy”的研究論文，構(gòu)建了CCR6修飾巨噬細(xì)胞膜（CCR6-MM）包裹Toll樣受體7/8激動(dòng)劑R848的趨化因子納米海綿（CCR6-MM@PS/R848），該納米海綿兼具CCL20吸附靶向能力與M2型TAMs向M1型極化功能，經(jīng)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其具有良好生物相容性，能雙重抑制腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，為NSCLC轉(zhuǎn)移治療提供了新型策略。

· 維真助力·

病毒產(chǎn)品：Lv-CCR6

感染細(xì)胞：RAW264.7細(xì)胞

MOI：50

RAW264.7細(xì)胞中CCR6表達(dá)顯著增加

研究結(jié)果
1.CCR6-MM@PS/R848的構(gòu)建、表征及生物相容性評(píng)估
單細(xì)胞測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，NSCLC轉(zhuǎn)移灶中M2型巨噬細(xì)胞通過高表達(dá)趨化因子CCL20驅(qū)動(dòng)腫瘤轉(zhuǎn)移，這為靶向CCL20-CCR6軸提供了理論依據(jù)。研究人員利用慢病毒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞，使其高表達(dá)CCR6（CCL20的受體），提取其細(xì)胞膜制備成CCR6修飾的巨噬細(xì)胞膜（CCR6-MM），然后使用薄膜水合法制備含R848（TLR7/8激動(dòng)劑）的脂質(zhì)體（PS/R848），將CCR6-MM與PS/R848融合，形成納米海綿復(fù)合物。驗(yàn)證結(jié)果顯示CCR6-MM@PS/ R848復(fù)合物在摻入R848組分的同時(shí)保留了原始細(xì)胞膜的功能特征，并能在體外和體內(nèi)有效靶向表達(dá)CCR6的細(xì)胞和組織。生物相容性評(píng)估表明，CCR6-MM@PS/R848納米顆粒在細(xì)胞和動(dòng)物層面均展現(xiàn)出優(yōu)異的安全性，該制劑無細(xì)胞毒性、溶血和器官毒性，表明其是進(jìn)一步臨床前和臨床開發(fā)的有希望的候選藥物。

CCR6-MM@PS/R848的表征

2.CCR6-MM@PS/R848將M2巨噬細(xì)胞重編程為M1表型
接下來，研究團(tuán)隊(duì)研究了CCR6-MM@PS/R848將Raw264.7巨噬細(xì)胞從M2表型重編程為M1表型的能力。結(jié)果顯示，經(jīng)CCR6-MM@PS/R848處理的細(xì)胞從M2典型的細(xì)長(zhǎng)紡錘形轉(zhuǎn)變?yōu)镸1典型的多角形形態(tài)，且M1標(biāo)志物上調(diào)，M2標(biāo)志物下調(diào)；同時(shí)細(xì)胞因子分泌譜改變，促炎性的M1特征細(xì)胞因子分泌增加，抑炎性的M2特征細(xì)胞因子分泌減少。這些結(jié)果表明，CCR6-MM@PS/R848具有強(qiáng)大的將M2巨噬細(xì)胞重編程為M1表型的能力。皮下腫瘤模型中，CCR6-MM@PS/R848組腫瘤體積顯著小于其他組，Ki67陽性率最低（細(xì)胞增殖受抑），腫瘤組織壞死區(qū)域顯著。進(jìn)一步的研究表明，CCR6-MM@PS/R848在體內(nèi)同樣能有效地將腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞從促瘤的M2表型重編程為抗瘤的M1表型。

CCR6-MM@PS/R848體外促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞M1極化

3.CCR6-MM@PS/R848抑制肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移
最后，研究團(tuán)隊(duì)探究了該納米顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞惡性行為的影響。ELISA檢測(cè)證實(shí)，經(jīng)CCR6-MM@PS/R848處理的巨噬細(xì)胞，其培養(yǎng)上清中的CCL20濃度因巨噬細(xì)胞M2向M1表型重編程和CCR6膜對(duì)CCL20的主動(dòng)吸附而顯著下降。使用上述處理后的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清來培養(yǎng)肺癌細(xì)胞（LLC），發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲數(shù)量均顯著減少，表明CCR6-MM@PS/R848對(duì)巨噬細(xì)胞的重編程有效地抑制了LLC細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能。在實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型中，體內(nèi)研究進(jìn)一步驗(yàn)證了其療效：與對(duì)照組相比，CCR6-MM@PS/R848治療組小鼠的生存期顯著延長(zhǎng)，肺臟轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量顯著減少。免疫組化與ELISA分析均顯示，治療組腫瘤組織中的CCL20水平顯著降低，明確了其體內(nèi)作用機(jī)制。上述體內(nèi)外結(jié)果一致表明，CCR6-MM@PS/R848能有效抑制肺癌轉(zhuǎn)移，且在整個(gè)過程中保持良好的生物相容性，凸顯了其巨大的治療潛力。

通過CCR6-MM@PS/R848進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤轉(zhuǎn)移

研究結(jié)論
本研究通過單細(xì)胞RNA測(cè)序技術(shù)，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶中M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的趨化因子分泌功能增強(qiáng)，其中CCL20成為關(guān)鍵靶點(diǎn)。體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了CCR6-MM與R848組合的治療潛力，證實(shí)其具有良好生物相容性、巨噬細(xì)胞極化效能，并能雙重抑制腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，揭示了趨化因子納米海綿作為NSCLC轉(zhuǎn)移治療新策略的巨大潛力。