增強AAV對腎臟組織的感染效率的方法分享

在腎臟研究中常用的AAV載體有AAV2、AAV6、AAV8和AAV9,其中以AAV9居多。啟動子方面可以選擇廣譜性啟動子CMV，也可以選擇Ksp1.3、NPHS1、ACTHR.Tenascin-C(TNC)、Ggt1等特異性啟動子，增強腎臟靶向性，具體可根據您要轉染的腎臟細胞類型進行選擇。

維真案例參考：
糖尿病腎病（DKD）是糖尿病常見的微血管并發癥，足細胞損傷是其關鍵病理特征。長鏈非編碼RNA 在DKD中表達異常，但其在足細胞損傷中的具體作用尚不明確。山東第一醫科大學附屬山東省立醫院王榮/呂智美教授團隊在Cellular and Molecular Life Sciences (IF 6.2)期刊發文“LncRNA ENST00000532153.1 alleviates podocyte injury by inhibiting PARP1-mediated PARylation of ATF3 in diabetic kidney disease”，首次闡明lncRNA ENST00000532153.1（簡稱lncRNA 153） 通過直接結合PARP1，抑制其介導的ATF3 PAR化修飾，進而減輕內質網應激和細胞凋亡，最終緩解DKD中的足細胞損傷，提示lncRNA 153和PARP1可能成為DKD治療的潛在靶點。

· 維真助力 ·
病毒產品：AAV9-nphs1-shPARP1、AAV9-NC
注射方式：尾靜脈注射
病毒用量：1×10^12vg per mouse

部分研究結果
1、LncRNA 153通過調控PARP1表達緩解糖尿病腎病足細胞損傷
研究數據證實LncRNA 153在人類DKD中表達下調，并且其表達量與腎功能指標和疾病嚴重程度密切相關，過表達LncRNA 153可減輕高糖誘導的足細胞損傷。通過RNA Pull-down、RNA免疫共沉淀及熒光共定位等分析發現LncRNA 153與足細胞中的PARP1相互作用，LncRNA 153的過表達能降低PARP1的蛋白水平，但不影響其mRNA水平；相反，敲低LncRNA 153則會增加PARP1的蛋白水平。使用蛋白質合成抑制劑CHX進行的實驗表明，LncRNA 153的過表達會加速PARP1蛋白的降解，提示LncRNA 153通過影響蛋白穩定性來調控PARP1。為了闡明足細胞PARP 1在DKD中的功能，體外實驗中敲低PARP1或使用抑制劑PJ34可緩解高糖誘導的足細胞損傷，相反過表達PARP1則加重損傷。體內實驗中，通過尾靜脈注射AAV9-nphs1-shPARP1，成功構建足細胞特異性PARP1敲低小鼠模型。在STZ誘導的DKD模型中，與未敲低的DKD小鼠相比，PARP1敲低小鼠腎臟病理損傷得到改善，腎皮質中內質網應激和凋亡相關蛋白的表達水平向正常回歸。使用PARP1抑制劑PJ34處理同樣產生上述PARP1敲低所帶來的保護效應，這些結果表明PARP1的激活在DKD相關的ER應激和凋亡中擔當著重要角色。

2、LncRNA 153通過調節PARP1和ATF3之間的相互作用參與HG誘導的足細胞損傷
研究人員進一步證實PARP1可與ATF3發生相互作用并介導其PAR化修飾，該修飾能激活ATF3的轉錄活性，激活的ATF3會通過結合GRP78等內質網應激相關基因的啟動子促進其轉錄，進而誘發足細胞內質網應激和細胞凋亡，最終加重足細胞損傷。由于lncRNA 153已被證明與PARP1結合并調節下游基因，因此研究團隊假設lncRNA可能充當PARP1和ATF3之間的連接分子。數據顯示，lncRNA 153的過表達降低了與ATF3結合的PARP1蛋白的水平，并抑制了由PARP1介導的ATF3的PAR化。同時，PARP1和ATF3的過表達顯著增強了GRP78啟動子與ATF3之間的相互作用，這種作用被lncRNA 153的異位表達所抵消。此外，LncRNA 153可以逆轉由PARP1/ATF3軸介導的足細胞內質網應激、凋亡和損傷。這些結果表明lncRNA153在PARP1和ATF3的相互作用中可發揮重要作用，影響下游基因的表達。

研究結論
本研究證實了糖尿病腎病會降低足細胞中lncRNA 153的表達并增加PARP1的表達。LncRNA 153直接與PARP1結合，破壞其與ATF3的相互作用，并抑制ATF3的多聚ADP 核糖化修飾及其活性，從而減輕內質網應激和細胞凋亡，緩解DKD中的足細胞損傷。因此，過表達lncRNA 153或阻斷PARP1–ATF3相互作用可能成為DKD的潛在治療策略。