大鼠血液及肺組織的微透析采樣技術(shù)詳解

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采用微透析采樣技術(shù)采集并測(cè)定大鼠血漿以及肺組織中的藥物濃度，探索其藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)

微透析采樣實(shí)驗(yàn)步驟

1、將大鼠進(jìn)行麻醉、備皮與消毒。

2、大鼠氣管切開插管，接通小動(dòng)物呼吸機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣，將插管與氣管固定并縫合皮膚。

3、肺探針植入：取出新的肺組織探針，將探針前端半透膜部分置于生理鹽水中，浸泡15-20分鐘，使半透膜充分浸潤(rùn)。同時(shí)，定位右側(cè)胸壁第5、6肋間(大約為劍突上1指半到2指)，沿肋骨間隙斜向切開，用鑷子鈍性分離使肋骨充分暴露。通過(guò)止血鉗離斷第5肋骨，使之充分暴露右肺，無(wú)損傷鑷輕輕提出右肺中葉，在臟層胸膜上作一小切口，沿切口向肺門方向斜向植入肺組織探針到肺組織內(nèi)。輕輕復(fù)位肺葉，以4-0帶線縫合將探針尾端固定于胸壁，防止脫落，逐層關(guān)閉胸腔)。PBS液灌注肺部探針，緩解創(chuàng)傷2h。

4、血管探針植入：取出新的血管探針，將探針前端半透膜部分置于生理鹽水中，浸泡15—20分鐘，使半透膜充分浸潤(rùn)。同時(shí)，沿右側(cè)腹股溝斜行切開，用鑷子鈍性分離，使股動(dòng)脈、股靜脈及股神經(jīng)分離，股靜脈充分游離，帶線結(jié)扎股靜脈遠(yuǎn)端，股靜脈近端用血管夾阻斷，用剪刀剪取一段長(zhǎng)約5mm的24號(hào)BD靜脈留置針外層套管，將其一端剪成斜向尖銳口，用lml注射器針頭在股靜脈上作一小切口，將之前準(zhǔn)備的套管用鑷子沿切口植入股靜脈中，血管夾松開后，管口可見血液流出，說(shuō)明操作成功，再次夾上血管夾，血管探針順套管放入股靜脈中，松開血管夾，繼續(xù)緩慢推送入下腔靜脈，股靜脈近心端帶線結(jié)扎固定探針尾部。逐層關(guān)閉切口。PBS液灌注血管探針，緩解創(chuàng)傷2h。

5、探針相對(duì)回收率測(cè)定：采用反向透析法測(cè)算探針回收率。將1ug／mL被測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)溶液，以2ul／min恒定速率灌注肺組織以及血管探針。經(jīng)過(guò)50min動(dòng)態(tài)平衡期后，每間隔10min采樣，收集5份透析液樣品，用以計(jì)算探針回收率。灌注液藥物濃度(C_perf)和透析液藥物濃度(C_dial)用高效液相質(zhì)譜法(HPLC—MS)測(cè)定，最終回收率為5份樣品平均值。相對(duì)回收率R_dial計(jì)算公式：R_dial=(C_perf—C_dial)／C_perf。

6、體內(nèi)實(shí)際藥物濃度(C_u)可由透析液濃度(C_m) 經(jīng)公式C_u=C_m／R_dial轉(zhuǎn)化獲得。觀察給藥后6小時(shí)的大鼠血液及肺組織藥動(dòng)學(xué)變化。

7、探針保存：將血管探針用蒸餾水灌注沖洗30min，沖洗結(jié)束后，將探針浸泡于肝素液中保存。

文章來(lái)源：

俞鑫. 微透析法研究鹽酸氨溴索對(duì)莫西沙星在肺炎鏈球菌肺炎大鼠肺部的藥動(dòng)學(xué)影響[D]. 上海:第二軍醫(yī)大學(xué),2015. DOI:10.7666/d.Y2813045.