動物微透析活體取樣技術操作要點匯總

 
 微透析技術的基本原理和方法
   
微透析(Microdialysis)技術是從上世紀八十年代發展起來的一種微量生物化學采樣、檢測技術，其基本原理是采用具有一定截留分子量的纖維半透膜制成極細的微透析探頭(Microdialysis Probe，MDP)，將探頭埋入待測的組織區域內，以恒定速度向探頭內灌注與組織液成分相近的等滲灌流液，當灌流夜流經探頭前端透析膜時，位于探頭膜外側的組織內較小分子量生物活性物質將順濃度梯度從膜外擴散入膜內并隨灌流液被引流出探頭外，以一定的時間間隔有序地接收透析液，由于透析管中的灌流液不斷流動更新，因此跨膜濃度梯度始終存在，微透析得以持續進行。并采用高靈敏度化學檢測系統連續檢測收集的透析液中待測生物活性物質濃度，便可監測活體動物或人體特定組織區域內細胞外生物活性物質濃度隨時間改變的動態變化。由于該技術具有活體取樣、動態觀察、定量分析、對組織損傷小、取樣少、方便、快捷、可連續監測且易實現自動化等優點，因此在國外已被廣泛應用于各個基礎醫學研究領域，對醫學、藥學、生命科學等領域，提供嶄新的技術的發展空間，并隨著這項技術的不斷改進與完善，在近幾年開始在臨床上加以應用。
  微透析技術是現代醫學發展起來的一種新型生物化學采樣技術。它可以對活體組織細胞外液進行生物化學采樣，幾乎適用于所用小分子活性物質的分析。而且對組織損傷極小。在麻醉或清醒的生物體上使用，特別適合于深部組織和重要器官的活體生化研究。
 
微透析系統一般由微透析探針、連接管、收集器、灌流液和微量注射泵組成。微透析探針是核心部件，由透析膜（管）與入液管和出液管連接而成，探針前端是多碳聚合物半透膜，透析分子極限為6－100kda,多為20kda。灌流液多為生理鹽水、林格氏液和人造腦脊液。
 
應用范圍
 
兒茶酚氨分析 精神藥物學 乙酰膽堿/酰膽堿分析 神經病理及癌癥研究
氨基酸分析 藥物動態學及毒理學 各種組織生化/藥物分析 生理學 藥理學
 
在藥代動力學研究領域、腦神經重癥監測、器官移植、心臟手術、糖尿病、整形手術等中有重要應用，發展速度極快。
 
微透析與傳統的灌流方法相比
 
微透析技術是一種在體取樣技術，其最大優點是可在基本不干擾體內正常生命過程的情況下進行在體（in vivo），實時（real time）和在線（on line）取樣。它具有以下特點：
 
（1）時間分辨性，可連續跟蹤體內多種化合物量隨時間的變化。
 
（2）空間分辨性，取樣即時即測，可真實代表取樣位點目標化合物的濃度，同時在體內不同部位插入探針可研究目標化合物的體內分布。
 
（3）提供不含蛋白質等大分子物質的游離態小分子化合物，樣品因不含蛋白質、酶等大分子物質，可不經預處理直接用于測定。對藥物研究有重要意義。
 
（4）不需處死動物和制備組織勻漿，不破壞機體完整性，可維持實際生理條件，消除傳統藥物代謝研究中因組織均勻化破壞細胞隔室造成對代謝研究結果的影響，減少實驗動物數量，并可獲得有關藥物代謝中間過程的信息。（傳統方法對血清、尿或糞便中代謝物濃度測定只能了解代謝的最終產物，而不能反映中間過程）
 
（5）研究藥動學可從同一動物收集大量樣本而不損失體液量，避免了傳統研究方法中因采血后血容量減少所造成對藥物分布及消除的影響，其時間分辨性可使藥動學資料更準確。
 
（6）樣品體積恒定，樣品中各成分濃度基本不變，膜對藥物的非特異性吸附較少。
 
（7）不會因在室溫取樣而酶解，提高樣品穩定性，可從容地進行分離和測定。
 
（8） 損傷小，使取樣可在清醒、自由活動的動物體內多個器官以及同一器官多個位點連續取樣，且動物本身自成空白對照，能準確及時掌握到藥物代謝的中間動態信息。
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微透析是一種從生物活體內進行動態微量生化取樣的新技術，能對大鼠、小鼠、兔子、羊、狗、猴等大小型動物的血液、腦、眼睛、心臟等組織區域進行微透析取樣，具有活體連續取樣、動態觀察、定量分析、采樣量小、組織損傷輕等特點，可運用于精神藥物、生理學、藥理學、生命胺分析、藥物分析等研究領域。  
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