產品定義
iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技術是由美國應用生物系統公司ABI研發的一種多肽體外標記技術。該技術采用4種或8種同位素的標簽，通過特異性標記多肽的氨基基團，然后進行串聯質譜分析，可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量。
技術原理
iTRAQ試劑由三部分組成：報告基團、質量平衡基團和肽反應標記試劑基團，形成4種或8種相對分子質量均等量（145或305）的異位標簽。
iTRAQ試劑組成圖（以4-plex為例）
iTRAQ試劑用于標記酶解后的肽段。在質譜圖中，任何一種iTRAQ試劑標記的不同樣本中的同一肽段表現為相同的質荷比。在串聯質譜中，報告基團、質量平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂，質量平衡基團丟失，帶不同同位素標簽的同一多肽產生不同的報告離子，根據報告離子的信號強度值可獲得樣品間相同肽段的定量信息，再經過軟件處理得到蛋白質的定量信息。
實驗流程
注釋：“樣品及實驗預判”包括定量、SDS-PAGE測試、酶解和質譜分析，對樣品質量及樣品之間的平行性進行初步判斷。
使用儀器
Thermo Scientific Q Exactive AB Sciex TripleTOFTM 5600
技術優勢
可同時對2-8種不同條件樣品進行蛋白質差異分析。
適合廣泛樣品類型：胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。
與凝膠分離的蛋白質定量技術相比，iTRAQ質譜定量技術可檢測到更多類型的蛋白質分子，如低豐度蛋白質、強酸（堿）性蛋白質、<10KD或>100KD的蛋白質分子。
應用領域
疾病標志物篩選 作用機制研究
植物抗逆研究 藥物作用靶點研究
特殊功能蛋白質篩選
樣品要求
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樣品類型 |
樣品要求（/組樣品） |
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蛋白質提取物 |
濃度 >1μg/μl，蛋白質總量 >300μg |
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細胞樣品 |
細胞量>107 |
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組織樣品 |
動物、微生物組織濕重>10mg；植物鮮嫩組織>100mg |
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體液樣品 |
血液體積>500μl |
