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          實(shí)時(shí)熒光定量PCR
          熒光定量PCR是美國(guó)PE公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù),該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的,與變通PCR相比,F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點(diǎn)。
          服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問(wèn):2175
          最后更新:2024-5-17半年訪問(wèn):67
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          熒光定量PCR起源:

          熒光定量PCR(也稱TaqMan PCR,以下簡(jiǎn)稱FQ-PCR)是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù),該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的,與變通PCR相比,F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點(diǎn)。與普通PCR相比,F(xiàn)Q-PCR具有許多優(yōu)點(diǎn):1、封閉反應(yīng),無(wú)需PCR后處理。2、特異性強(qiáng),靈敏度高。3、采用對(duì)數(shù)期分析,摒棄終點(diǎn)數(shù)據(jù),定量準(zhǔn)確。4、定量范圍寬,可達(dá)到10個(gè)數(shù)量級(jí)。5、儀器在線式實(shí)時(shí)檢測(cè),結(jié)果直觀,避免人為判斷。6、可實(shí)現(xiàn)一管雙檢或多檢。7、操作安全,縮短時(shí)間,提高效率。熒光定量PCR是 通過(guò)對(duì)PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。

          熒光定量PCR分類:
          TaqMan熒光探針
              PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5‘-3‘外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
           
          SYBR Green熒光染料
              SYBR Green是一種DNA結(jié)合染料,能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下,它不發(fā)出熒光,但一旦結(jié)合到雙鏈DNA中以后,便可以發(fā)出熒光。它的最大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合,用于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟(jì)角度考慮,它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結(jié)合,所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴(kuò)增,那它就會(huì)影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不利因素,可以通過(guò)選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。

          【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】

          分子診斷、病理診斷、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞藥篩、動(dòng)物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因編輯、病理檢測(cè)、基因芯片、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測(cè)序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)!

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