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          	臺盼藍檢測活性
          借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中最常用的死細胞鑒定染色方法之一。
          服務類別:分子與細胞總訪問:9410
          最后更新:2024-5-17半年訪問:109
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          實驗介紹:

          正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中最常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現象。

          臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數或顯微鏡下拍照后計數,就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。并且操作非常簡單。

          操作步驟:

          1. 用Hanks液配制0.1%臺盼藍溶液;

          2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液來消化培養的貼壁細胞;

          3. 再加入適量Hanks液制成細胞懸液;

          4. 將待染色細胞稀釋至所需濃度(方法及濃度范圍與細胞計數相同);

          5. 每0.1ml細胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴,室溫下染3—5min;

          6. 染色過的細胞材料,取一滴細胞懸液置玻片上,加蓋玻片后放高倍鏡下觀察;

          7. 死亡的細胞著淺藍色并膨大,無光澤。活細胞不著色并保持正常形態,有光澤;

          8. 計數1000個細胞中的活細胞和死細胞數目;

          9. 統計未染色細胞。可按公式計算出細胞活率。

          細胞活率(%)=未染色的細胞數/觀察的細胞總數×100

          注意事項:

          1. 染色時間不能太長,否則活細胞也會逐漸積累染料而染成顏色,使監測結果偏低;

          2. 另可結合細胞計數方法,同時進行細胞計數和活力檢測。

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