實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)造模誘導方法及核心試劑的優勢和作用

實驗性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE）是研究多發性硬化（MS）的金標準動物模型，通過模擬自身免疫性T細胞攻擊中樞神經系統（CNS），再現MS的神經炎癥、脫髓鞘及神經功能障礙等核心病理特征。EAE模型在MS發病機制研究、神經免疫調節藥物篩選（如Roflumilast）、髓鞘修復與神經保護療法開發等研究領域應用廣泛。

愛必信憑借專業的研發實力和嚴格的質量控制體系，精心打造了高穩定性、高重復性的EAE模型研究全套試劑組合，造模核心試劑優勢如下：
✅ 現貨速發：百日咳毒素國內現貨、極高純度（>99%）、高品質、高性價比
✅ 高發病率：C57BL/6小鼠免疫后10-14天穩定發病（臨床評分2-4分）
✅ 病理重現性好：明確髓鞘脫失（LFB染色）& Th17細胞浸潤（流式驗證）
✅ 多維評價體系：支持臨床評分、行為學、組織病理學、分子生物學全維度驗證

1. EAE模型核心試劑

（2）佐劑
完全弗氏佐劑（CFA, Complete Freund’s Adjuvant）
成分：礦物油 + 滅活結核分枝桿菌（如 Mycobacterium tuberculosis H37Ra，濃度 4-5 mg/mL）
作用：增強免疫應答，與MOG₃₅₋₅₅乳化后使用

（3）免疫增強劑
百日咳毒素（Pertussis Toxin, PTX）
劑量： 200-500 ng/只小鼠（腹腔注射）
注射時間：免疫當天（Day 0）及第2天（Day 2）
作用：破壞血腦屏障，促進T細胞浸潤中樞神經系統

2. EAE模型誘導方法
（1）實驗準備
實驗動物：通常選擇6 - 8周齡的雌性C57BL/6小鼠或Sprague-Dawley大鼠。
動物數量：根據實驗設計，每組至少需要10只動物以確保統計學意義。
動物適應：將動物在實驗環境中適應1周，保持溫度、濕度和光照條件穩定。試劑準備：將
MOG_35-55肽溶解于生理鹽水中，與等體積的CFA混合乳化，形成均勻的乳劑。

（2）EAE誘導
第0天：
乳劑制備：將300 µg MOG_35-55肽與300 µL CFA混合乳化。
注射：將乳劑分兩次（每側100 µL）皮下注射于小鼠雙側腋窩、腹股溝和背部。
PTX注射：腹腔注射200 ng PTX。
第2天：
再次注射PTX：腹腔注射200 ng PTX。

3. EAE模型驗證
EAE模型的驗證需通過臨床評估、行為學、組織病理學、分子生物學等多維度進行，以下是系統的驗證方法分類及操作要點。

（1）臨床評分驗證
①標準化評分系統0-5分量表（最常用）：從第0天開始，連續觀察30天或更長時間。
評分標準：0分：無癥狀。1分：尾部無力或癱瘓。2分：后肢無力。3分：后肢癱瘓。4分：四肢癱瘓。5分：死亡。

②體重監測：EAE小鼠通常伴隨體重下降（>10%提示模型成功），需每日記錄，體重持續下降可能需倫理干預。

（2）行為學檢測
①運動功能評估
轉棒實驗（Rotarod）：加速模式（4-40 rpm，5min內完成）記錄跌落時間，反映協調性與耐力。
步態分析（CatWalk或足印法）：量化步幅長度、基寬、擺動速度。

②抑郁樣行為檢測
強迫游泳實驗（FST）：記錄不動時間（反映絕望行為）。
懸尾實驗（TST）：輔助驗證抑郁表型。

（3）組織病理學驗證
①取材與處理
灌注固定：4%多聚甲醛灌注后取脊髓（腰膨大段）和腦組織。
切片制備：石蠟切片（5μm）或冷凍切片（10μm）。

②染色方法

（4）分子生物學驗證
①流式細胞術
細胞亞群分析：Th1（CD4+IFN-γ+）、Th17（CD4+IL-17+）、Treg（CD4+FoxP3+）。
樣本來源：脾臟、淋巴結、中樞神經系統單細胞懸液。

②細胞因子檢測
ELISA/液相芯片：促炎因子：TNF-α、IL-6、IL-17
抗炎因子：IL-10、TGF-β
qPCR：脊髓/腦組織中細胞因子mRNA表達。

③蛋白表達分析
Western Blot：
炎癥通路蛋白：NF-κB p65、pSTAT3
神經保護標志物：BDNF、NGF

4. 模型成功標準
基礎標準：發病率>80%（臨床評分≥2）；病理確認HE顯示炎性浸潤+ LFB證實髓鞘脫失。
高級標準：行為學異常（Rotarod時間↓50%）；分子標志物：Th17比例↑2倍，CNS中IL-17水平顯著升高。

6. 特色應用案例
東南大學醫學院神經精神病學研究所附屬中大醫院神經內科張志珺教授團隊采用實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)大鼠模型，研究Roflumilast的作用。他們的研究表明Roflumilast有可能成為改善MS抑郁癥狀和急性時相運動障礙的潛在藥物，其抗炎、減炎和抑制小膠質細胞激活的特性提示其在MS治療中的潛力。IL6、IL1B和TNF是MS和抑郁癥共有的關鍵基因，其編碼的細胞因子存在蛋白質相互作用。IL-6可能在多發性硬化癥相關抑郁中發揮重要作用，IL-6拮抗劑可能成為改善多發性硬化癥抑郁的潛在治療策略。研究結果為進一步闡明MS和抑郁癥的發病機制提供了重要線索^[1]。

參考文獻：
[1] Wang Z, Zhang Y, Chai J, Wu Y, Zhang W, Zhang Z. Roflumilast: Modulating neuroinflammation and improving motor function and depressive symptoms in multiple sclerosis[J]. J Affect Disord. 2024;350:761-773. doi:10.1016/j.jad.2023.12.074

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