一步法多重熒光定量逆轉錄PCR檢測4種水禽病毒

導讀
全球水禽病毒性疾病呈現出復雜多變的態勢，涉及眾多病原體，對水禽養殖業造成了巨大損害。近年來，全球水禽病毒性疾病顯著增加，包括鴨坦布蘇病毒（DTMUV）、鴨肝炎病毒（DHV）、番鴨呼腸孤病毒（MDRV）和番鴨細小病毒（MDPV）的爆發。這4種新興的水禽傳染病，由于臨床癥狀重疊，鑒別這些疾病頗具挑戰性。因此，開發一步多重實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測方法是非常必要的。

 文獻解讀：
廣西大學Chenchen Wang等人近期于Microorganisms（影響因子IF：4.1）發表了一篇名為《One-Step Multiplex Real-Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription PCR for Simultaneous Detection of Four Waterfowl Viruses》的研究，文章開發出一種一步多重實時熒光定量逆轉錄PCR（qRT-PCR）檢測方法，能同時檢測鴨坦布蘇病毒（DTMUV）、鴨肝炎病毒（DHV）、番鴨呼腸孤病毒（MDRV）和番鴨細小病毒（MDPV），為水禽病毒病診斷提供了有效工具。

 應用亮點：

• 使用Pangaea 6快速熒光定量PCR儀器系統（Aperbio，蘇州，中國）進行反應對單重和多重qRT-PCR反應體系進行優化，包括引物和探針濃度、退火溫度、擴增循環數等。

• 該方法具有高特異性、敏感性和重復性，避免與其他病毒如禽腺病毒（FADV）、傳染性法氏囊病病毒（IBDV）等多種病毒發生交叉反應。

• 臨床樣本檢測結果：對326份臨床樣本檢測發現，四種病毒均有一定陽性率，存在多種病毒共感染情況，且該方法與現有檢測標準檢測結果一致性高。

 文章相關結果：
標準質粒pDTMUV、pDHV、pMDRV和pMDPV以最終濃度1：1：1：1混合，再進行十倍梯度稀釋至最終濃度2.68×10⁷~2.68×10⁰拷貝/µL（每反應5.36×10⁷~5.36×10⁰拷貝），并建立了多重qRT-PCR標準曲線。

圖例：多重qRT-PCR標準曲線

特異性、敏感性和重復性良好：該方法特異性高，對其他病毒無交叉反應；檢測限為2.68×10¹copies/μL ；批內和批間變異系數均小于2%。

圖例：特異性測試結果

圖例：敏感性測試結果