DAP-seq技術在MdWRKY115調控蘋果干旱和滲透脅迫耐受研究中的應用

蘋果是一種重要的落葉果樹，廣泛種植在半干旱和干旱地區。干旱脅迫會嚴重影響蘋果的生長、品質和產量。WRKY轉錄因子在植物非生物脅迫響應中起關鍵作用。然而，蘋果中WRKY轉錄因子響應干旱和滲透脅迫的分子機制尚不清楚。

2023年5月22日，河北農業大學與西北農林科技大學的聯合研究成果，在線發表在Horticultural Plant Journal 期刊(Q1區，影響因子5.7)，文章題目為“Overexpression of the transcription factor MdWRKY115 improves drought and osmotic stress tolerance by directly binding to the MdRD22 promoter in apple”。該研究使用DNA親和純化測序(DAP-seq)技術鑒定了蘋果轉錄因子MdWRKY115的結合基序和靶基因。揭示了MdWRKY115通過直接結合MdRD22啟動子增強植物對干旱和滲透脅迫耐受性的調節機制。

該研究從“金冠”蘋果品種的葉片中克隆了MdWRKY115基因，該基因編碼包含356個氨基酸的蛋白。序列比對和系統進化分析表明MdWRKY115蛋白具有一個非常保守的WRKY結構域，是第Ⅲ組WRKY家族成員之一。

圖1. 不同植物中WRKY轉錄因子的序列比對和系統進化分析

qRT-PCR結果說明，干旱和滲透脅迫下MdWRKY115的表達上調。GUS活性分析表明，MdWRKY115的啟動子活性在滲透脅迫下明顯增強。亞細胞定位分析表明，MdWRKY115定位于細胞核。轉錄激活分析表明，MdWRKY115是一個轉錄激活因子，其轉錄激活域位于N端區域。

圖2. MdWRKY115在干旱和滲透脅迫下的表達模式及轉錄激活分析

轉基因株系的表型分析表明，在擬南芥幼苗和蘋果愈傷組織中過表達MdWRKY115，顯著提高了它們對干旱和滲透脅迫的耐受性。

圖3. 在甘露醇處理下，過表達MdWRKY115的轉基因擬南芥幼苗的表型

圖4. 過表達MdWRKY115的轉基因擬南芥增強了對干旱的耐受性

圖5. 在甘露醇處理下，過表達MdWRKY115的轉基因蘋果愈傷組織的表型

DAP-seq鑒定了MdWRKY115的結合元件是W-box基序（核心序列是TTGAC）。通過對MdWRKY115結合位點的篩選發現，脅迫相關基因MdRD22是MdWRKY115的潛在靶基因。電泳遷移率測定（EMSA）驗證了MdWRKY115與MdRD22啟動子的特異性結合。此外，通過檢測轉基因蘋果愈傷組織發現，過表達MdWRKY115基因能夠促進MdRD22的表達。這些結果表明，MdWRKY115通過直接與MdRD22的啟動子結合，調控其表達。

圖6. MdWRKY115直接與MdRD22啟動子結合，調控MdRD22的表達

小結：該研究鑒定了蘋果中與干旱和滲透脅迫耐受性相關的一個調控因子MdWRKY115。MdWRKY115是一個第Ⅲ組WRKY轉錄因子，定位于細胞核，具有轉錄激活活性。MdWRKY115通過與MdRD22啟動子結合，調控MdRD22的表達，提高了轉基因擬南芥和蘋果愈傷組織對干旱和滲透脅迫的耐受性。總之，該研究為MdWRKY115通過調控MdRD22的表達來增強蘋果對干旱和滲透脅迫耐受性的分子機制提供了新見解，也對利用分子遺傳策略培育耐旱植物新品種具有重要意義。

參考文獻：Dong Q, Tian Y, Zhang X, Duan D, Zhang H, Yang K, Jia P, Luan H, Guo S, Qi G, Mao K, Ma F, Overexpression of the transcription factor MdWRKY115 improves drought and osmotic stress tolerance by directly binding to the MdRD22 promoter in apple, Horticultural Plant Journal. https://doi.org/10.1016/j.hpj.2023.05.005