SDS凝膠電泳常用試劑配制

SDS凝膠電泳常用試劑配制方法如下：

一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

3×SDS-PAGE loading buffer 10ml
1M Tris-Hcl (PH 6.8) 1.5ml
SDS 0.6g
BPB(溴酚藍(lán)) 30mg
甘油（丙三醇） 3ml
去離子水 5.5ml

1、將除BPB以外的藥品溶解。SDS常溫下很難溶解，可以在37℃水浴溶解。溶解后，再加入BPB，進(jìn)行溶解；

2、把溶好的buffer分裝到1.5ml的離心管中，1ml/管，常溫放置；

3、使用前，每管加入30µL巰基乙醇。

注意事項(xiàng)：巰基乙醇為危險(xiǎn)品，加入的過程在通風(fēng)櫥中完成，并且?guī)Ш檬痔住?br />
二、10×PBS的配制

0.1M PBS（10×PBS） 1L
NaH2PO4.2H2O 2.83g
Nacl 85g
Na2HPO4.12H2O 28.98g

1、用去離子水將以上藥品進(jìn)行溶解；（溶解的非常慢，可能需要過夜）

2、調(diào)PH值到7.2，用0.4µm的濾膜過濾。常溫保存；

3、工作時(shí)用的是1×PBS。

三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

1.5M Tris-Hcl 250ml
Tris 45.425g

1、用200ml去離子水將Tris溶解。

2、用濃鹽酸調(diào)PH值到8.8。

3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

4、0.4µm的濾膜過濾，常溫保存。

注意事項(xiàng)：Tris的緩沖能力很強(qiáng)，調(diào)PH值時(shí)，費(fèi)些時(shí)間，但不要調(diào)過。

四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

1M Tris-Hcl 250ml
Tris 30.275g

1、用200ml去離子水將Tris溶解；

2、用濃鹽酸調(diào)PH值到6.8；

3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml；

4、0.4µm的濾膜過濾，常溫保存。

五、30%丙烯酰胺的配制

30%丙烯酰胺 250ml
丙烯酰胺 72.5 ml
BIS甲叉丙烯酰胺 2.5 ml

1、把藥品用去離子水溶解后定容到250ml；

2、用濾紙過濾，放在棕色瓶子中，4℃保存。

注意事項(xiàng)：兩種藥品有毒性，配制過程要帶手套和口罩。

六、10%SDS的配制

1．1g SDS加入10ml去離子水進(jìn)行溶解；

2．分裝到1.5ml離心管中，-20℃保存。

七、10%過硫酸銨的配制

1．1g 過硫酸銨加入10ml去離子水進(jìn)行溶解。

2．分裝到1.5ml離心管中，-20℃保存。

八、5×SDS-PAGE電泳緩沖液的配制

5×SDS-PAGE電泳緩沖液 1L
Tris 15.1g
Glycine（甘氨酸） 94g
SDS 5g

將以上藥品用去離子水溶解后定容到1L，常溫保存。工作時(shí)用的是1×SDS-PAGE電泳緩沖液。

九、考馬斯亮藍(lán)R-250染色液的配制

1、往1g考馬斯亮藍(lán)R-250中加入250ml異丙醇，在磁力攪拌器上攪拌六小時(shí)以上；

2、加入650ml去離子水，磁力攪拌器攪拌過夜；

3、再加入100ml冰醋酸進(jìn)行溶解，磁力攪拌器攪拌；

4、在通風(fēng)櫥內(nèi)用濾紙進(jìn)行過濾。常溫保存。染色液只能反復(fù)用兩次。

注意事項(xiàng)：在磁力攪拌器上攪拌時(shí)，要把容器封口。

十、脫色液的配制

脫色液 1L
醋酸（冰乙酸） 100ml
乙醇（無水乙醇） 50ml
去離子水 850ml

常溫保存。