ELISPOT酶聯免疫斑點技術系統的配置與使用指南

酶聯免疫斑點技術，即ELISPOT技術，是被用于測定分泌特異性抗體或細胞因子的單個細胞對特異性抗原免疫應答能力的細胞免疫學技術。它集高靈敏度、高通量、單細胞水平、功能性檢測等優點，被廣泛應用于疫苗免疫原性的效價評估、細胞治療的效價評估、基因治療的毒性評估、傳染性疾病/自身免疫性疾病的診斷和療效評估、以及腫瘤治療的療效評估、器官移植免疫排斥的研究、以及基礎免疫學等的研究中。

ELISPOT技術和ELISA技術都是基于雙抗夾心法，但是ELISPOT技術是對單個細胞的功能研究，在整個ELISPOT流程中加入了細胞培養的過程以及斑點分析的流程，這就使整個ELISPOT操作和分析變得復雜起來。為了確保實驗操作和分析的客觀性，以及實驗結果的一致性和可重復性，必須建立一套標準化的流程，包括實驗操作的標準化和實驗人員的專業培訓；樣本制備和處理過程的標準化，結果和數據分析流程的標準化等。
作為最早在國內引入ELISPOT技術的生物公司，為了在國內普及ELISPOT技術，達科為和國內外多位ELISPOT專家以及多家ELISPOT試劑和儀器廠家合作，并針對ELISPOT技術標準化流程方面自主開發了一系列產品。是以，達科為可以說是當之無愧的ELISPOT專家。
 

1．樣本制備
樣本制備中，細胞狀態（細胞分離、細胞凍存）、細胞培養（培養基有無血清）、細胞數量和活率對ELISPOT實驗都有一定程度的影響。
1.1 細胞分離
ELISPOT檢測的是細胞免疫功能，在細胞分離過程中，需要保持細胞存活率，確保細胞功能不受改變。
 

不同脾細胞分離方法對ELISPOT檢測的影響（達科為數據）
 

如上圖，傳統的紅細胞裂解法在紅細胞裂解的過程中，可能導致不同程度的白細胞損傷，進而影響細胞狀態；達科為“達優”品牌分離液專為ELISPOT技術開發安全無毒，確保高純度淋巴細胞的同時，確保細胞的高活率。

 
1.2 培養基
血清中含有未知的ELISPOT敏感成分（如異嗜性抗體等），既可能抑制斑點的生成，也可能增加噪聲斑點。因此，細胞培養時，建議使用無血清培養基。

含血清培養基和無血清培養基對ELISPOT檢測的影響（達科為數據）
 

 

凍存細胞存活率對ELISPOT的影響
 

 
1.4 細胞數量和活率
由于ELISPOT技術檢測的是分泌細胞因子/抗體等的陽性細胞數或頻率，若每孔/每板/每次鋪板的細胞數不能保持一致，那得到的斑點數量SFU（斑點形成單元）就沒有可比性。另外，細胞狀態好壞是ELISPOT結果是否準確可靠的關鍵因素之一。除了影響結果的準確性，細胞狀態不佳還會影響斑點圖像的美觀性。

因此，確保細胞計數和活率分析的結果準確性以及流程標準化，才能確保實驗結果的重復性和可信度。樣本細胞的來源主要是外周血或脾臟，即使進行了分離純化，也不能避免分離后的細胞存在不同程度的紅細胞和血小板干擾。故而傳統的臺盼藍染色方法并不能真正精確計數淋巴細胞，采用雙熒光核染料AO/PI染色可以精準計數淋巴細胞和活率，是ELISPOT檢測流程中的推薦選擇。
 

細胞計數中任何一個環節發生改變都可能影響細胞計數的結果。
 

達科為公司為ELISPOT操作流程中的細胞計數與活率分析部分提供Cellometer品牌雙熒光細胞計數儀，確保結果的準確性與可靠性。
 

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2. ELISPOT/FluoroSpot試劑盒
高品質、穩定且符合SOP生產流程的ELISPOT/FluoroSpot試劑盒是ELISPOT流程中關鍵的一環。
達科為公司不僅擁有自主研發的高品質“達優”品牌ELSIPOT試劑盒，同時與全球ELISPOT領域頂尖廠家合作，提供高品質、多種屬、多規格的ELISPOT/FluoroSpot試劑盒，以滿足不同用戶需求。

 

 
3. 斑點計數和數據分析
斑點計數和數據分析是ELISPOT流程的最后一個環節，也是至關重要的一個環節。要確保最后這一至關重要的環節，首先就要保證讀板儀的自動化和標準化，減少對實驗操作人員經驗的依賴，降低主觀因素的干擾。

Mabtech公司本身作為全球最大ELISPOT讀板儀用戶，不滿足于市面上現有的讀板儀主觀性過強、過于依賴操作員經驗、操作繁瑣復雜且數據結果重復性、一致性差的現狀，自主研發推出了新一代的高端型號IRIS ELISPOT/FluoroSpot讀板儀與基礎型ASTOR ELISPOT讀板儀，顛覆了斑點計數算法，推出RAWspot技術，自動定位，自動較準，固定焦距，實現了數據客觀標準化，操作簡便人性化，是一款真正意義上的科學家為科學家設計/用戶為用戶設計的新一代讀板儀。
 

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4. 實驗人員培訓
前面已經提到，ELISPOT操作流程涉及因素較多，同時對實驗人員的實驗技能也有一定要求。為了確保ELISPOT流程的標準化，實驗人員的技能培訓是必不可少的環節。
達科為作為最早引入ELISPOT技術的生物公司，以普及ELISPOT技術和標準化為己任，在國內舉辦了多場ELISPOT技術培訓班，從技術理論到實驗實操，讓更多實驗人員系統地學習、掌握ELISPOT技術。
 

5. ELISPOT項目服務平臺
如果您的實驗室還沒有具備開展ELISPOT項目的條件，達科為旗下行健雅生物實驗平臺擁有強大的專業技術支持團隊，可以為您提供讀板服務和項目。
 

 
 

6. ELISPOT技術手冊


達科為自2005年編纂國內第一本《ELISPOT技術手冊》以來，不斷改進優化手冊內容，現已修訂至第六版，全國發行量超3萬多冊！
《ELISPOT技術手冊》內容覆蓋ELISPOT/FluoroSpot技術原理/歷史以及發展狀況；詳細描述了ELISPOT實驗的整個操作流程以及與ELISPOT實驗相關的一系列技術；分析了ELISPOT實驗中常見問題及解決方案；談及了ELISPOT讀板儀的發展史和數據處理及結果分析；也總結了ELISPOT流程的標準化與質量控制環節；最后講述了ELISPOT技術的應用領域和展望。
這不折不扣的是一本ELISPOT屆的“武功秘笈”，值得擁有和私藏！

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ELISPOT實驗從樣本制備到最后的數據分析，以及技術服務和技術培訓班，每個環節達科為都能提供相應的優質產品與專業服務。
 

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