血清外泌體中的miRNA作為KD診斷biomarker

皮膚粘膜淋巴結綜合癥（muco-cuta-meous lymph node syndrome，MCLS）又稱川崎病（Kawasaki disease），是一種以全身血管炎變?yōu)橹饕�病理的急性發(fā)熱性出疹性小兒疾病。雖然已有的研究已經發(fā)現一些血來源的蛋白分子或者miRNA有潛在的診斷能力，但是，其有效性還有待提高。外泌體，一種包含了細胞特異性信息的囊泡結構，保護了內部的分子免受胞外酶類的降解。因此，通過檢測的外泌體中的遺傳物質，是尋找可靠診斷biomarker的理想方式。本研究從檢測血清外泌體中的miRNA入手，篩選了可用于KD特異性診斷biomarker的潛在分子。

研究思路

研究結果

1. 外泌體分離與確認

通過SBI的ExoQuick試劑盒分離，研究人員得到了KD病人，正常人，和IVIG治療后病人的血清外泌體。電鏡觀察與CD9, CD81 和TSG101三個marker蛋白鑒定，研究人員確認了從血清中分離出來了的外泌體分子。

2. 外泌體中KD特異性miRNA篩選

為尋找到能特異性反映KD特征的biomarker，研究人員運用miRNA表達譜芯片（伯豪生物提供），比較了外泌體中的miRNA表達差異。分析顯示，miR-1260a,miR-4701-5p, miR-885-5p, miR-328 和miR-197-3p，在KD組中上調，而在IVIG治療后又下調。

3. 外泌體中miRNA表達驗證

為驗證芯片結果的可靠性，研究人員對11個候選的miRNA，在其他獨立的60個樣本（20個健康人，20個KD病人，20個IVIG治療病人）和5個腺病毒感染病人（ADV）進行了驗證。由于目前沒有外泌體中的miRNA內參基因，研究人員把每一個的表達情況與所有11個比較作為參考。結果顯示，miR-1246/miR-4436b-5p在KD和正常人，IVIG治療與KD中差異顯著，在正常人和IVIG治療中不顯著；miR-197-3p/miR-671-5p則只在ADV和KD中差異顯著。

4. KD診斷biomarker模型驗證

為驗證上述篩選到的biomarker的有效性，研究人員用另外兩個醫(yī)院的樣本進行了驗證。這些病人包括54個健康個體，54個KD病人，10個ADV病人，13個EBV病人，12個JIA病人和1個SF病人。兩個醫(yī)院的病人（Centre 1和 Centre 2）的盲測結果顯示，KD病人基本能和非KD病人區(qū)分開來。因此，通過檢測外泌體中的上述4個miRNA的表達， 可以作為潛在的KD診斷biomarker。

研究結果

本研究通過篩選血清外泌體中的miRNA，運用表達譜芯片找到了KD病人特異性表達的miRNA。后期通過大量的病人樣本，健康樣本和其他類似疾病樣本驗證，表明其找到的miRNAs可以作為KD特異性的診斷指標。該研究從外泌體的角度為KD診斷提供了新的思路，作為其他疾病研究的小伙伴們，該研究還是可以參考的。

原文出處：
Jia HL, Liu CW, Zhang L, et al.Sets of serum exosomal microRNAs as candidate diagnostic biomarkers for Kawasaki disease. Sci Rep. 2017 Mar 20;7:44706.