糞便基因組DNA提取試劑盒（Stool DNA Extraction Kit）使用說明書

糞便基因組DNA提取試劑盒（Stool DNA Extraction Kit）

存儲室溫(15℃-25℃) 干燥保存，有效期12個月，2℃-8℃保存時間更長。【注】試劑盒開封后溶液A、B 、C 、D 需在2-8℃保存。

貨號&規格

YJ0219-50 | 50T

YJ0219-100 | 100T

產品組分

試劑盒內容 YJ0219-50（50T） YJ0219-100（100T）

溶液A 25mL 50mL

溶液B 3mL 6mL

溶液C 5mL 10mL

溶液D 10mL 20mL

漂洗液 15mL 15mL×2

洗脫液 15mL 30mL

吸附柱 50個 100個

收集管 50個 100個

說明書 1份 1份

 產品簡介

本試劑盒適合于從各種糞便中提取微生物DNA。對糞便中各種細菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多態性。

使用本試劑盒提取的DNA產量大、完整性好，可直接用于各種常規操作，包括酶切、PCR 、文庫構建、Southern  雜交等實驗。

 使用說明

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1、稱取糞便樣本 0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成細粉末，加入 450ul  溶液A  震蕩混勻。

*  也可直接稱取樣本 0.1-0.5g 于離心管( 建議使用 2ml  圓底管) ，加入 450ul 溶液 A  劇烈震蕩混勻 1-2min 至沒有固體塊。  使用液氮研磨效果最佳。

2 、加入50ul 溶液B  充分顛倒混勻(  不要劇烈震蕩)，65℃水浴 6min，每2min充分顛倒混勻一次。

3 、加入100ul  溶液C  充分顛倒混勻(  不要劇烈震蕩)，12000 rpm 離心10min   。

4 、將上清轉移到新的離心管，12000rpm離心2min   。

5 、在吸附柱中加入 200ul  溶液D  ，將離心后的上清加入到帶有溶液 D  的吸附柱中，用移液器吹吸幾次混勻，12000 rpm 離心1min。

6 、將收集管中的濾出液混勻后重新吸入吸附柱(  必須)，12000 rpm 離心1min。

7 、倒掉收集管中的廢液，在吸附柱中加入漂洗液 500ul，12000 rpm 離心1min。

8 、倒掉收集管中的廢液，重復步驟 7  兩次(共漂洗三次)。

9 、倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管，12000 rpm 離心2min   。

10、拿出吸附柱在室溫干燥數分鐘(  因季節及氣候等因素不等)，或50℃干燥1min。

11 、將吸附柱放入一個新的離心管中，加入 50-100ul  洗脫液(65  ℃預熱)，12000 rpm 離心1min。

12、將離心管中的液體重新加入到吸附柱中，12000 rpm 離心1min。離心管中即為糞便微生物 DNA 溶液。

 注意事項

1 、新鮮的糞便樣本會得到更高的產率，不同樣本在采樣前應先查閱相應的最佳保存條件。

2 、若溶液中出現渾濁可在 37℃水浴中溶解片刻至清澈，不會影響結果。

3 、在需要吸取上清液的步驟中應避免吸到沉淀，否則會堵塞吸附柱，并影響產物純度。

4 、洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul ，體積過小會影響回收效率；建議使用試劑盒附帶的洗脫緩沖液，用水洗脫也會損失部分產物；DNA應保存在-20  ℃避免反復凍融，以防降解。

5 、 液體試劑避免接觸皮膚，若意外接觸應立即使用大量清水沖洗。