效應細胞功能鑒定和抗體藥物研發之ADCC分析

一睹免疫細胞搏殺戰場的風采

效應細胞功能鑒定和抗體藥物研發之ADCC分析

（Celigo全視野細胞掃描分析儀）

1.ADCC作用

ADCC作用即抗體依賴細胞介導的細胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)：指表達IgGFc受體的NK細胞、巨噬細胞和中性粒細胞等，通過與已結合在病毒感染細胞和腫瘤細胞等靶細胞表面的IgG抗體的Fc段結合，而達到殺傷這些靶細胞的作用。

2.ADCC作用的關鍵點

1. 效靶比(E:T)：即效應細胞和靶細胞的比率，是分析ADCC作用的關鍵因素之一。
2. 抗體濃度：最佳抗體濃度的摸索是ADCC作用的關鍵因素；
3. 效應時間：最佳效應時間點的摸索也是ADCC作用的關鍵因素

3.檢測方法：

全視野細胞掃描分析儀能多時間點圖像監測和定量分析效應細胞殺死靶細胞的搏殺戰場。

4.Celigo監測實驗流程舉例

1）Calcein AM熒光染料：一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑。

Calcein AM能夠輕易穿透活細胞膜，進入到細胞質后，酯酶會將其水解為Calcein(鈣黃綠素)留在細胞內，發出強綠色熒光。因為其細胞毒性低，是最適合作為活細胞的熒光探針。

1. 分析時，活的靶細胞被Calcein標記，發出強綠色熒光；如果靶細胞死亡或裂解，Calcein釋放出來，綠色熒光不再存在。因此可以通過Calcein AM熒光的變化，分析效應細胞對靶細胞的殺傷作用。

1.）ADCC分析流程：

5.Celigo成像

1）  0h靶細胞全孔圖像           綠色熒光圖像                 明場+熒光疊加

2）0h靶細胞計數圖像（取局部圖像） 

      綠色熒光細胞圖像                  圈定的計數的細胞圖像

3）不同時間點靶細胞計數圖像

            0h                 2h                4h             6h

6.ADCC殺傷公式和殺傷曲線

CAM+_t0: 0h的Calcein AM陽性數           nCAM+_t: t小時的Calcein AM陽性數

                                              ADCC殺傷曲線

7.基于Celigo圖像的Calcein AM法和LDH釋放法對比

8.不同效靶比(E:T)對ADCC作用的影響

                  10:1                 5:1                  2.5:1

             1.3:1                  0.6:1                0.3:1            

9.不同效應時間點搏殺的細胞圖像

10.不同抗體濃度搏殺的細胞圖像

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