探究如何提高AAV血清對肝臟的基因遞送效率

AAV血清型的選擇
在肝臟中應用較多的有AAV2、AAV5、AAV8、AAV9及AAV-DJ等血清型，研究表明AAV8、AAV9和AAV-DJ對肝臟均具有較強的親嗜性，其中AAV8嗜肝性更強，用于活體動物注射表現為免疫原性低，感染效率高，AAV-DJ的體內肝細胞轉導效率與AAV8相近，且在體外實驗中也能表現出較強的感染效率。
研究者還可根據實驗目的及動物模型的不同選擇不同的血清型，其中AAV7、AAV8對小鼠肝臟感染具有較好效果；而在人體肝臟中AAV2、AAV5和AAV8親和性較強。
如下圖所示：無論是選用門靜脈還是尾靜脈注射，AAV8均能有較高的肝臟轉導水平。

啟動子的選擇
在肝臟中，廣譜型啟動子CMV即可高效表達，也可以選擇肝臟特異啟動子增強組織靶向性，如ALB、TBG和ApoEHCR-hAAT，其中TBG應用較多。

客戶案例
文章標題：Hepatocyte Apolipoprotein J Accelerates Injury-induced Liver Fibrosis by Activation Signal Transducer and Activator of Transcription 3 Through Ranbp2 Mediated-SUMOylation
發表期刊：Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology，IF 7.4
合作客戶：廣西醫科大學第一附屬醫院段雙迪團隊
維真助力：AAV
基因信息：ApoJ f，載脂蛋白J
病毒產品：AAV8-TBG-control、AAV8-TBG-ApoJ f
實驗動物：8周齡C57BL/6J小鼠
注射方式：尾靜脈注射
注射量：2*1011GC/只

研究背景
信號轉導子和轉錄激活子3（STAT3）信號通路的失調與氧化還原穩態密切相關，并加劇肝損傷。載脂蛋白J（ApoJ）是一種對氧化還原變化敏感的伴侶，ApoJ如何調節STAT3通路尚不清楚。本研究證明ApoJ在加速肝纖維化進展中起著關鍵作用，ApoJ/STAT3/RanBP2軸的治療策略可能為預防和治療纖維化肝病提供一種新方法。
部分結果展示
1. 腺相關病毒介導的ApoJ過表達增強肝纖維化
作者發現纖維化肝組織中肝細胞ApoJ表達升高，肝細胞特異性ApoJ缺乏能緩解小鼠模型的肝纖維化。為闡明ApoJ在肝纖維化進展中的作用，作者通過AAV8- TBG-ApoJ建立了肝臟ApoJ過表達模型，隨后將小鼠暴露于CCl4、TAA或MCD飲食，發現ApoJ的過表達導致ALT和AST的血清水平顯著升高、膠原沉積和纖維化增強、HSC活化和巨噬細胞浸潤增加，以及促纖維化和炎癥基因表達的顯著上調。此外ApoJ過表達與MDA水平升高和GSH和SOD水平降低有關，表明抗氧化能力受損。這些數據共同表明，AAV8介導的肝臟中ApoJ的過表達加劇了小鼠模型中損傷誘導的纖維化過程。機制研究發現ApoJ促進RanBP2介導的STAT3 SUMO化，從而促進STAT3激活。

2. STAT3 抑制劑在CCl4誘導的肝纖維化治療中的作用
為了探索肝纖維化的潛在治療干預措施，作者研究了STAT3強效抑制劑Stattic對CCl4誘導的肝纖維化的影響，發現Stattic顯著改善了ApoJ過表達小鼠的肝損傷。此外，ApoJ肝過表達小鼠的Stattic治療顯著減少了肝膠原沉積和aSMA表達，并改善了肝功能。這些發現共同表明，抑制ApoJ/STAT3軸可以減輕肝纖維化的發病機制。重要的是，Stattic還顯示出在逆轉或改善已確立的肝纖維化方面的治療潛力，表明其療效超出了預防應用。這些結果強調了Stattic在預防和治療肝纖維化方面的雙重作用。

實驗結論
本研究證明載脂蛋白J通過信號轉導子和轉錄激活子3調節肝細胞和肝星狀細胞之間的關鍵串擾，表明載脂蛋白J是治療肝纖維化的有前景的靶點，針對ApoJ/STAT3/RanBP2軸的治療策略可能為預防和治療纖維化肝病提供一種新方法。