YIJI 線粒體呼吸鏈復(fù)合物 II 活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

YIJI 線粒體呼吸鏈復(fù)合物 II 活性比色法定量檢測 試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
YIJI 線粒體呼吸鏈復(fù)合物 II（琥珀酸－輔酶 Q 還原酶）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成輔酶
Q 同功類似物二氯酚靛酚，通過反應(yīng)系統(tǒng)測定樣品中二氯酚靛酚還原后吸光峰值的變化，即采用比色法測
定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線
粒體樣品（動物、人體、酵母）以及細(xì)胞或組織裂解懸液樣品的琥珀酸－輔酶 Q 還原酶的特異性活性檢測。
可用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無菌，
即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測敏感。
技術(shù)背景
線粒體呼吸鏈復(fù)合物II，通常稱為琥珀酸－輔酶Q還原酶或琥珀酸脫氫酶（Succinate-Coenzyme Q Reductase；
Succinate Dehydrogenase），是線粒體電子傳遞鏈與三羧酸循環(huán)鏈接的載體：含有四個亞單位，包括共價結(jié)
合的輔基黃素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide；FAD）和三個鐵硫中心（Fe-S clusters），以及細(xì)
胞色素b亞單位，其最特征性的酶活性是丙二酸鈉敏感的琥珀酸－輔酶Q還原酶。復(fù)合物II催化琥珀酸
（succinate）被氧化為富馬酸（fumarate），線粒體內(nèi)電子由供體FAD傳遞到內(nèi)膜上輔酶Q受體（泛醌；
ubiquinone）的能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)，進(jìn)行呼吸鏈傳遞。該酶異常會導(dǎo)致嗜鉻細(xì)胞瘤（paraganglioma）、腎上腺嗜
鉻細(xì)胞瘤（pheochromocytoma）和Leigh綜合征。基于琥珀酸底物，通過琥珀酸－輔酶Q還原酶的催化，氧
化為富馬酸，同時氧化型二氯酚靛酚（dichlorophenal-indophenol；DCPIP）轉(zhuǎn)化為還原型二氯酚靛酚
（dichlorophenal-indophenol；DCPIPH 2 ），在分光光度儀下產(chǎn)生吸光峰值的變化（600nm 波長），由此定量
測定琥珀酸－輔酶Q還原酶的特異活性。其反應(yīng)系統(tǒng)是：
Complex II
SUCCINATE + DCPIP + CoQ → FUMARATE + DCPIPH 2 + CoQH 2
藍(lán)色 無色
↑Abs 600 nm ↓Abs 600 nm
產(chǎn)品內(nèi)容
YIJI 緩沖液（ReagentA） 20 毫升
YIJI 反應(yīng)液（Reagent B） 2.5 毫升
YIJI 陰性液（Reagent C） 2 毫升
YIJI 底物液（Reagent D） 500 微升
產(chǎn)品說明書 1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；YIJI 反應(yīng)液（Reagent B）和 YIJI 底物液（Reagent D），避免光照，
有效保證 6 月
用戶自備
2
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化；YIJI 緩沖液（Reagent A ）室溫預(yù)
熱；YIJI 反應(yīng)液（Reagent B ）和 YIJI 底物液（Reagent D ）注意避光。然后進(jìn)行下列操作。
一、 測定準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好待測樣品（例如純化線粒體樣品等），置于冰槽里
2． 設(shè)定好分光光度儀（溫度為 30℃）：波長為 600nm，間隔 60 秒，讀數(shù) 6 次（共 5 分鐘），并置零
二、 背景對照測定
1． 移取 780 微升 YIJI 緩沖液（Reagent A ）到新的比色皿
2． 加入 100 微升 YIJI 反應(yīng)液（Reagent B ）
3． 加入 20 微升 YIJI 底物液（Reagent D ）
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進(jìn) 30℃培養(yǎng)箱里靜置 3 分鐘
6． 加入 100 微升 YIJI 陰性液（Reagent C ）
7． 上下傾倒數(shù)次，混勻（限定在 3 秒之內(nèi)）
8． 即刻放入分光光度儀檢測，此為背景空對照：600 波長讀數(shù) 0 分鐘 －600 波長讀數(shù) 1 分鐘或 5 分鐘
三、 樣品活性測定
1． 移取 780 微升 YIJI 緩沖液（Reagent A ）到新的比色皿
2． 加入 100 微升 YIJI 反應(yīng)液（Reagent B ）
3． 加入 20 微升 YIJI 底物液（Reagent D ）
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進(jìn) 30℃培養(yǎng)箱里靜置 3 分鐘
6． 加入 100 微升待測樣品（注意：10 微克總線粒體蛋白 ）
7． 上下傾倒數(shù)次，混勻（限定在 3 秒之內(nèi)）
8． 即刻放入分光光度儀檢測，此為樣品活性讀數(shù)：600 波長讀數(shù) 0 分鐘 －600 波長讀數(shù) 1 分鐘或 5 分鐘
四、 計(jì)算樣品活性
【（樣品讀數(shù)－背景讀數(shù)）X 1（體系容量；毫升）X 樣品稀釋倍數(shù)】÷【0.1（樣品容量；毫升）X 21.8（毫
摩爾吸光系數(shù) X 1 或 5（反應(yīng)時間；分鐘）】＝單位/毫升÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝單位/毫克