B-NDG B2m KO plus在蛋白表達分析與抗腫瘤藥效研究的應(yīng)用
B-NDG小鼠（NOD.CB17-PrkdcscidIL2rgtm1/Bcgen）是百奧賽圖公司自主開發(fā)的，NOD-scid遺傳背景的IL2rg基因敲除小鼠，綜合了NOD-scid-IL2rg null背景特征，具有重度免疫缺陷表型，缺乏成熟的T、B和NK細胞，是目前國際公認的免疫缺陷程度高的工具小鼠，已被廣泛應(yīng)用于人體免疫系統(tǒng)重建。
人PBMC植入的人源化小鼠是體內(nèi)分析人體免疫應(yīng)答的有吸引力的模型。我們先前報道了人 PBMC 可成功植入 B-NDG 小鼠。然而，由于這些小鼠存在嚴(yán)重的異種移植物抗宿主病 (xeno-GVHD)，實驗的窗口有限，所以敲除 MHCⅠ 類 β2-微球蛋白 (β2m) 是解決這一問題的有效途徑。但據(jù)報道，F(xiàn)cRn 是 α 鏈和 β2m 的異源二聚體，與其他 IgG Fc 受體的不同之處在于其在結(jié)構(gòu)上與 MHCⅠ類分子相關(guān)。研究表明，在 β2m 缺陷小鼠中， FcRn 的幾種功能受到影響，例如，與同窩正常小鼠相比，新生 β2m 缺陷幼崽在出生時的 IgG 血清水平較低，并且在斷奶前蓄積的 IgG 較少 [1,2]。
因此，百奧賽圖在B-NDG小鼠的基礎(chǔ)上開發(fā)了衍生產(chǎn)品B-NDG B2m KO plus 小鼠，一起來瞧一瞧吧~
1、B-NDG B2m KO plus小鼠部分?jǐn)?shù)據(jù)展示：
蛋白表達分析
組織病理學(xué)切片
B-NDG B2m KO plus小鼠的抗腫瘤藥效研究
B-NDG B2m KO plus小鼠——
PBMC免疫系統(tǒng)重建的有力工具
B-NDG B2m KO plus 小鼠在基因敲除鼠 B2m 基因的同時，表達了融合在 FcRn 基因中的 B2m 基因。這種小鼠結(jié)合了 B-NDG 小鼠背景同時存在MHC I 類缺失，與野生型小鼠相比，IgG藥物在小鼠體內(nèi)沒有表現(xiàn)出代謝差異，有效減緩GVHD反應(yīng)并延長藥效實驗的窗口期。該模型可用于研究異種移植抗宿主病的體內(nèi)機制和治療藥物療效評價。
MHC-I 類分子的蛋白表達分析
從 B-NDG B2m KO plus、B-NDG、NOD-scid 小鼠 (n=5) 中采集血細胞、脾細胞和骨髓細胞，并通過 MHC I 類 (H-2 Kd) 流式細胞術(shù)進行分析。
結(jié)果顯示：MHC I 類僅在B-NDG，NOD scid小鼠檢測到，B-NDG B2m KO plus小鼠未檢測到。
T、B 和 NK 細胞的蛋白表達分析新
從 B-NDG B2m KO plus、B-NDG、NOD-scid 和 C57BL/6 小鼠 (n=5) 中采集血細胞、脾細胞和細胞，并用 T、B 和 NK 細胞通過流式細胞術(shù)進行分析。
結(jié)果顯示：在 B-NDG B2m KO plus 和 B-NDG 小鼠中未檢測到 T、B 和 NK 細胞。NOD scid 小鼠 未檢測到T、B 細胞，而可以檢測到NK細胞。在 C57BL/6 小鼠中可檢測到 T、B 和 NK 細胞。
B-NDG B2M KO plus 和對照小鼠組織的組織病理學(xué)切片
(A) C57BL/6 脾臟結(jié)構(gòu)正常，濾泡界限清楚；
(B) NOD-scid 脾臟顯示白髓發(fā)育不全；
(C，D) 來自 B-NDG 和 B-NDG B2m KO plus 的脾臟均顯示濾泡結(jié)構(gòu)完全喪失；
(E) C57BL/6 胸腺葉結(jié)構(gòu)正常，皮質(zhì)界限清楚；
(G) NOD scid 小鼠的胸腺葉發(fā)育不良，缺乏明確的皮質(zhì)；
(H) B-NDG 小鼠的胸腺葉嚴(yán)重發(fā)育不良，缺乏明確的皮質(zhì)；
(F) B-NDG B2m KO plus 顯示正常解剖位置上無胸腺葉。
PK實驗——不同小鼠血漿IgG濃度的測定
用人IgG處理純合的B-NDG、B-NDG B2m KO小鼠、B-NDG B2m KO plus小鼠和C57BL/6小鼠(n=5)。收集不同時間點的血樣進行PK測定。
結(jié)果表明，B-NDG和B-NDG B2m KO plus小鼠組PK結(jié)果基本一致具有藥代動力學(xué)特征，與野生型小鼠無差異，而B-NDG B2m KO小鼠組在2天后的時間點無法測定藥物濃度。結(jié)果表明B-NDG B2m KO plus小鼠有效解決了單純敲除小鼠B2M基因?qū)е驴贵w半衰期縮短的問題。
在人PBMC誘導(dǎo)的GvHD模型中，B-NDG B2m KO plus小鼠 vs B-NDG 小鼠新
方法：B2M/FcRn（11 周齡雌性，n=5）和 B-NDG（10 周齡雌性，n=6）小鼠在第 0 天靜脈植入來自 3 名健康供體 (D1-3) 的 20M 人 PBMC。根據(jù)下表，每周大約兩次對 GvHD 的臨床體征進行評分。在 Prism 中分析數(shù)據(jù)。數(shù)值表示為平均值±SEM。**: P<0.01.
結(jié)論：在人 PBMC 誘導(dǎo)的 GvHD 模型中，與 B-NDG 小鼠相比，B2M/FcRn（B-NDG B2m KO plus） 小鼠顯著延長了生存期，同時可延遲 GvHD 的發(fā)生并降低其嚴(yán)重程度。
PBMC RKO模型在B-NDG B2m KO plus小鼠中的抗腫瘤功效
方法：B-NDG B2m KO plus小鼠 (n = 7/8)，植入人 PBMC 并接種人 RKO 腫瘤細胞系，用 PD-1抗體進行處理。
結(jié)論：利用B-NDG B2m KO plus建立的PBMC免疫重建小鼠模型中PD-1能夠有效抑制 RKO 腫瘤生長。B-NDG B2m KO plus小鼠體重的穩(wěn)定表現(xiàn)出較少的 GvHD 癥狀。
NCI-H226 CDX 腫瘤模型在 B-NDG B2m KO plus小鼠中進行的 CAR-T 體內(nèi)療效研究
CAR-T 療法在B-NDG B2m KO plus小鼠中的抗腫瘤活性。將人 NCI-H226(1E7) 植入B-NDG B2m KO plus小鼠中。(A) 當(dāng)腫瘤大小約為 150±50 mm3 時，對小鼠進行分組。此時，使用 CAR-T 細胞 (5E5) 按照圖中所示的時間表進行處理。(B) 治療期間的體重變化。
結(jié)果表明：CAR-T 細胞對 B-NDG B2m KO plus小鼠的腫瘤生長有不同的抑制作用。B-NDG 是人 CAR-T 細胞療效研究的強有力模型。
參考文獻
[1] Dilip K. Challa, Ramraj Velmurugan, Raimund J. Ober and E. Sally Ward. FcRn: From Molecular Interactions to Regulation of IgG Pharmacokinetics and Functions[J]. Curr Top Microbiol Immunol 2014，382:249-272.
[2] Asja Praetor，Walter Hunziker. β2-microglobulin is important for cell surface expression and pH-dependent IgG binding of human FcRn [J]. Journal of Cell Science,2002，115:2389-2397.
