細胞凋亡檢測-Caspase半胱氨酸蛋白酶與磷脂酰絲氨酸（PS）

 
1965年澳大利亞科學家發現，結扎鼠門靜脈后，電鏡觀察到肝實質組織中有一些散在的死亡細胞，這些細胞的溶酶體并未被破壞，顯然不同于細胞壞死。這些細胞體積收縮、染色質凝集，從其周圍的組織中脫落并被吞噬，機體無炎癥反應。1972年Kerr等三位科學家首次提出了細胞凋亡的概念，宣告了對細胞凋亡的真正探索的開始，在此之前，關于胚胎發育生物學、免疫系統的研究，肝細胞死亡的研究都為這一概念的提出奠定了基礎。
 
細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。
 
細胞凋亡與程序性死亡
 
其實從嚴格的詞學意義上來說，細胞程序性死亡（PCD）與細胞凋亡是有很大區別的。細胞程序性死亡的概念是1956年提出的，PCD是個功能性概念，描述在一個多細胞生物體中某些細胞死亡是個體發育中的一個預定的，并受到嚴格程序控制的正常組成部分。例如蝌蚪變成青蛙，其變態過程中尾部的消失伴隨大量細胞死亡，高等哺乳類動物指間蹼的消失、顎融合、視網膜發育以及免疫系統的正常發育都必須有細胞死亡的參與。
 
這些形形色色的在機體發育過程中出現的細胞死亡有一個共同特征：即散在的、逐個地從正常組織中死亡和消失，機體無炎癥反應，而且對整個機體的發育是有利和必須的。因此認為動物發育過程中存在的細胞程序性死亡是一個發育學概念，而細胞凋亡則是一個形態學的概念，描述一件有著一整套形態學特征的與壞死完全不同的細胞死亡形式。但是一般認為凋亡和程序性死亡兩個概念可以交互使用，具有同等意義。
 
細胞凋亡與壞死的區別
 
雖然凋亡與壞死的最終結果極為相似，但它們的過程與表現卻有很大差別。
 
壞死（necrosis）：壞死是細胞受到強烈理化或生物因素作用引起細胞無序變化的死亡過程。表現為細胞 脹大，胞膜破裂，細胞內容物外溢，核變化較慢，DNA降解不充分，引起局部嚴重的炎癥反應。
 
凋亡是細胞對環境的生理性病理性刺激信號，環境條件的變化或緩和性損傷產生的應答有序變化的死亡過程。其細胞及組織的變化與壞死有明顯的不同。
 
Abbkine對于細胞凋亡的研究已經深入到了細胞，蛋白和分子水平：
 
蛋白質水平的Annexin V系列細胞早期凋亡試劑盒，檢測磷脂酰絲氨酸（PS）的外翻：
 

產品名稱	貨號	Abs/Em
Annexin V-AbFluor™ 555 Apoptosis Detection kit	KTA0003	Annexin V- AbFluor™ 555: Abs/Em = 555/565 nm	Cy3, TRITC, Alexa Fluor 546, Dylight 549
Annexin V-AbFluor™ 647 Apoptosis Detection kit	KTA0004	Annexin V- AbFluor™ 647: Abs/Em = 650/665 nm; PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)	Cy5, Alexa Fluor 647, Dylight 649

 
細胞水平的Caspase系列試劑盒，檢測凋亡相關蛋白Caspase的表達量，檢測中期凋亡：

貨號		產品名稱
KTA3024	細胞凋亡 （比色法）	Caspase-6 Assay Kit (Colorimetric)
KTA3025		Caspase-8 Assay Kit (Colorimetric)

Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引發的級聯反應是細胞凋亡過程的中心環節，其激活主要包括線粒體依賴途徑和死亡受體介導的信號轉導途徑，激活后的下游Caspase，通過切割特異性底物，導致細胞凋亡。

Abbkine凋亡研究試劑盒使用FAQ：

1.做TUNEL凋亡檢測，需要抗原修復或者冰凍修復嗎？
需要細胞固定，不需要做抗原修復，本類試劑盒標記的是細胞核內的斷裂基因，而不是抗原蛋白，因此不需要進行抗原修復。

2.Annexin V-AbFluor™ 488 Apoptosis Detection kit試劑盒，可不可以在染色之后，等到60分鐘左右再去做下一步呢?
因為這個凋亡實驗是活染，細胞先染完第一種染料，如果間隔時間太長，細胞活力就會受影響。

3.Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (JC-1)試劑盒，能用分光光度計檢測嗎？
不建議用，該試劑盒是基于線粒體跨膜電位的變化，運用JC-1進行細胞染色，區分健康和凋亡細胞，建議用流式細胞儀或者熒光顯微鏡進行檢測。

4.檢測Caspase，組織樣本是400-500個細胞，該樣本量是否足夠？
本試劑盒需要組織的量大概是5 - 20 mg。