AAV（腺相關病毒）的結構及生產過程介紹

瀏覽次數：8080　發布日期：2016-10-26　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

AAV的“誕生”，有它們就夠了！

在日常生活中，我們經常聽到或者親身參與到各種“圈”中，例如，時尚圈，娛樂圈，藝術圈，還有上海的各大商圈和可食用的甜甜圈，當然，對大多數人來說最熟悉的莫過于微信朋友圈了。話說，在基因治療領域也有一個圈，小編暫且給它取名叫“病毒載體圈“，此圈中有這樣一位傲嬌的明星大咖，它不僅理化性質獨特（可耐受凍融、65℃高溫及多種有機溶劑），而且身懷絕技，同時有著極強的可塑性（分12種血清型和100多種突變體），深受廣大科研和醫學工作者的青睞。在如今的生命科學領域，追求它似已蔚然成風，那這位“病毒載體圈”的神奇新秀到底是誰呢？

它，就是腺相關病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）。

AAV最初是在純化的腺病毒液中發現的一種污染成分，故而得名。其復制增殖需要腺病毒或者皰疹病毒等輔助病毒的協助，所以AAV是一種復制缺陷型的病毒，歸屬于細小病毒科依賴病毒屬。AAV是無包膜的單鏈線狀 DNA 病毒，其基因組約4.7kb，兩末端為反向末端重復序列（inverted terminal repeat sequence, ITR），ITR 序列之間為病毒蛋白編碼區，包含兩個開放閱讀框架，產生復制蛋白Rep、衣殼蛋白Cap和包裝激活蛋白AAP。

圖1 AAV基因組的結構

AAV作為最早通過歐盟FDA認證的基因治療載體，因其具有宿主范圍廣、非致病性、低免疫原性、長期穩定表達外源基因、良好的擴散性能和物理性質穩定等優點，已被廣泛地應用于基礎研究和臨床試驗中。而且，越來越多的臨床試驗證明了AAV載體的有效性和良好的安全性，使之成為基因治療研究的熱點，并被認為是介導基因治療的理想載體之一。那么，如此受歡迎而又自帶明星光環的AAV究竟從何而來？本期，小編就為大家帶來AAV“誕生”的那些事。

在病毒型基因傳遞系統中，有一個很大的顧慮就是輔助質粒和載體質粒發生重組而恢復出野生型病毒。目前大多數生成重組腺相關病毒（rAAV）的實驗方案均需要共轉染一個載體質粒和一個表達病毒復制和結構基因的包裝質粒到腺病毒(Ad)感染的培養細胞中。這無疑增加了野生型AAV產生的可能性。

吉凱的AAV生產只要有質粒和細胞就夠了！我們的“AAV Helper-Free System“由病毒載體、pAAV-RC載體和pHelper載體三種質粒組成。其中，pAAV-RC載體質粒包含了AAV編碼復制蛋白和病毒衣殼蛋白的rep和cap基因；pHelper載體質粒提供了生產具感染性的AAV病毒顆粒所需的腺病毒基因產物（例如： E2A,E4和VA RNA 基因）；其余的腺病毒基因產物則由穩定表達腺病毒E1基因的宿主細胞提供。該包裝系統的最大優點就是不用加輔助病毒，一方面，排除了輔助病毒對rAAV的污染；另一方面，減少了野生型AAV產生的可能，進一步提高了AAV產品的安全性。

圖2 AAV的生產示意圖（原創）