腺病毒腫瘤內注射小鼠的病毒用量的影響研究

文章標題：LncRNA EP300-AS1 interacts with PTBP1 to destabilize PRMT5 mRNA and suppresses NSCLC growth and metastasis
發表期刊：Cell Death & Disease，IF 9.6
合作客戶：北部戰區總醫院張德宇團隊
維真助力：腺病毒
基因信息：LncRNA EP300-AS1
病毒產品：Ad-EP300-AS1-GFP
實驗動物：NTG小鼠
注射方式：腫瘤內注射
注射量：5 x 10^8 pfu 、1 x 10^9 pfu
實驗細胞：A549、EBC1
MOI：10、50、100、500

研究背景
非小細胞肺癌（NSCLC）是常見的惡性癌癥之一，其特征是轉移率和死亡率高，目前非小細胞肺癌生長和進展的分子機制在很大程度上仍不清楚。在本研究中EP300 AS1被確定為非小細胞肺癌中一種關鍵的腫瘤抑制性長非編碼RNA（lncRNA），在體外和體內都能抑制非小細胞肺癌細胞的生長和轉移，并與更好的臨床結果相關，這為非小細胞肺癌的預測和治療提供了一種新型的調節機制和有前途的靶點。

部分結果展示
1. EP300-AS1抑制非小細胞肺癌細胞增生、遷移和侵襲
作者發現EP300-AS1是與非小細胞肺癌轉移和進展相關的重要lncRNA，為了研究其在非小細胞肺癌細胞中的生物學作用，作者在A549和EBC1細胞中敲低和過表達EP300-AS1。細胞增生、集落形成試驗、傷口愈合分析表明，與對照細胞相比，敲低組細胞生長得更快，細胞的遷移和侵襲能力增強；相反過表達組細胞的繁殖、遷移和侵襲能力降低。這些結果表明EP300-AS1在體外具有抑制非小細胞肺癌細胞增生、遷移和侵襲的能力。接下來作者使用0、10、50、100和500 MOI的Ad-EP300-AS1感染非小細胞肺癌細胞，發現Ad-EP300-AS1以劑量依賴性方式抑制A549和EBC 1細胞增生。體內實驗表明，腫瘤內注射Ad-EP300-AS1抑制A549腫瘤生長。這些發現表明EP300-AS1對非小細胞肺癌具有治療潛力。機制研究發現EP300-AS1以PTBP1依賴性方式降低PRMT5 mRNA穩定性，進而在體外和體內抑制NSCLC細胞增殖、侵襲和轉移。

2. 沉默EP300-AS1促進A549腫瘤生長和轉移
為了研究EP300-AS1在體內腫瘤生長中的作用，作者將穩定表達EP300-AS1shRNA的A549細胞皮下注射到NTG小鼠的右腹，發現EP300-AS1沉默的A549細胞形成了更大的腫瘤。此外EP300-AS1敲低增加了PRMT5和Ki67陽性細胞數量。生物發光成像顯示EP300-AS1敲低組的肺部區域的發光信號明顯更高，H&E染色證實小鼠肺部腫瘤結節數量增加。但PTBP1的敲除能抑制和消除上述結果，還抑制和消除了EP300-AS1敲低誘導的腫瘤轉移。

實驗結論
本研究全面闡述了EP300-AS1在NSCLC中的抗腫瘤生物學功能及其分子機制。EP300-AS1以PTBP1依賴性方式降低PRMT5 mRNA穩定性，在體外和體內抑制NSCLC細胞增殖、侵襲和轉移。在肺腺癌（LUAD）和肺鱗細胞癌（LUSC）患者中，EP300-AS1表達與PRMT5表達呈負相關。這些發現表明EP300-AS1-PTBP1 PRMT5軸是非小細胞肺癌進展中的關鍵調節途徑，為非小細胞肺癌的預測和治療提供了新的調節機制和靶點。