核酸與蛋白互作檢測(cè)常用技術(shù)的原理與優(yōu)勢(shì)

核酸與蛋白質(zhì)的相互作用是細(xì)胞內(nèi)眾多生理過(guò)程得以實(shí)現(xiàn)的決定性因素之一，了解哪些核酸和蛋白之間存在相互作用、闡明核酸與蛋白互作的位點(diǎn)(和可能的結(jié)構(gòu))，對(duì)于理解核酸-蛋白互作復(fù)合物在調(diào)節(jié)細(xì)胞過(guò)程或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中所起的作用至關(guān)重要。目前可用于檢測(cè)核酸蛋白互作的技術(shù)很多，主要可分為兩類(lèi)：以核酸為中心的檢測(cè)方法和以蛋白為中心的檢測(cè)方法。

以核酸為中心的檢測(cè)方法有酵母單雜交，ChIRP，RNA/DNA pull down等，此類(lèi)技術(shù)可以檢測(cè)與特定核酸互作的多種蛋白。

酵母單雜交

原理：在報(bào)告基因啟動(dòng)子上游添加目的DNA序列，將待測(cè)蛋白與AD（轉(zhuǎn)錄激活域）融合表達(dá)，若DNA與待測(cè)蛋白存在互作，則AD激活報(bào)告基因表達(dá)。

優(yōu)勢(shì)：能夠鑒定ChIP等技術(shù)難以檢測(cè)到的低豐度和組織特異性的蛋白，并能用來(lái)確定和細(xì)化蛋白具體結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)構(gòu)建酵母單雜交文庫(kù)可以獲得眾多與特定DNA序列存在互作的蛋白或TF。

ChIRP

原理：利用核酸探針富集特定RNA，與RNA存在互作的染色質(zhì)、蛋白、DNA等物質(zhì)也被富集，利用測(cè)序或質(zhì)譜等技術(shù)分析與RNA存在互作的蛋白和DNA等物質(zhì)。

優(yōu)勢(shì)：既可用于研究RNA、蛋白質(zhì)、DNA三種物質(zhì)的互作，也可用于RNA-蛋白質(zhì)、RNA-DNA（或RNA）兩種物質(zhì)之間互作；利用CHIRP聯(lián)合MS或測(cè)序，可以在細(xì)胞中尋找與目的RNA存在互作的所有蛋白和DNA（或RNA）。

RNA/DNA pull down

原理：利用核酸探針直接富集與特定RNA或DNA互作的蛋白，利用質(zhì)譜等技術(shù)分析與RNA/DNA存在互作的蛋白信息。

優(yōu)勢(shì)：實(shí)驗(yàn)流程和周期較短，核酸探針設(shè)計(jì)范圍廣。