酵母雙雜交技術(shù)的原理和優(yōu)勢

蛋白互作是驗證基因或疾病作用機理不可或缺的一環(huán)，常用的檢測方法有：酵母雙雜、串聯(lián)親和純化、co-IP、FRET、熒光蛋白（螢光素酶）融合等。不同的檢測方法各有優(yōu)勢，本期將介紹酵母雙雜的原理和優(yōu)勢。

· 酵母雙雜的原理 ·
酵母作為一種真核生物，其基因的轉(zhuǎn)錄需要反式作用因子的參與。反式作用因子GAL4由DNA結(jié)合域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD)組成，完整的GAL4能結(jié)合至啟動子上游順式作用元件并啟動轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致下游基因的表達(dá)。
在構(gòu)建機制上，可將已知蛋白與BD構(gòu)建為融合蛋白，將待測蛋白和AD構(gòu)建為融合蛋白，若已知蛋白與待測蛋白存在相互作用，則兩者相互結(jié)合，導(dǎo)致BD與AD在空間上的距離非常相近，發(fā)揮完整的反式作用因子功能，啟動下游報告基因表達(dá)，可通過檢測報告基因的表達(dá)判斷蛋白的互作水平。
在實際應(yīng)用中，通常有大量商業(yè)化產(chǎn)品直接使用，如AH109菌株，其既不能產(chǎn)生GAL4，又是Trp和Leu缺陷型菌株，無法在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基中生長。當(dāng)兩種配套載體所表達(dá)的融合蛋白能夠相互作用時，完整的反式作用因子能夠激活酵母中基因表達(dá)，使得酵母可在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基上生長，達(dá)到篩選互作蛋白的功能。

基于AD/BD的核系統(tǒng)酵母雙雜交原理