端粒酶活性檢直接檢測法和間接檢測法的優(yōu)缺點(diǎn)對比

端粒酶活性和催化亞基hTERT基因表達(dá)量作為重要的腫瘤標(biāo)志物，與90%惡性腫瘤呈正相關(guān)，可應(yīng)用于干細(xì)胞成瘤性快檢。中檢院在進(jìn)行干細(xì)胞制品質(zhì)量復(fù)核時，也是進(jìn)行端粒酶活性檢查，采用端粒酶活性（TRAP法）和hTERT基因表達(dá)量的方法，這兩種方法的檢測結(jié)果是一致的。   
1. 直接檢測法（如TRAP法及其衍生技術(shù)）
優(yōu)點(diǎn)：
直接檢測端粒酶活性：通過延伸端粒重復(fù)序列（TTAGGG）來反映端粒酶的生物學(xué)功能，是端粒酶活性檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
廣泛應(yīng)用：TRAP法是經(jīng)典方法，經(jīng)過多年優(yōu)化（如RQ-TRAP、TRAP-ELISA等），在科研和臨床中有較多文獻(xiàn)支持。
缺點(diǎn)：
操作復(fù)雜：需抽提蛋白、端粒酶延伸反應(yīng)、PCR擴(kuò)增（QPCR/電泳/雜交）等多步驟，耗時耗力，技術(shù)難度高。
穩(wěn)定性差：樣本處理（如蛋白提取）易導(dǎo)致端粒酶失活，影響結(jié)果可靠性。
靈敏度與特異性不足：SYBR Green法引物特異性較差，易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增；ELISA法重復(fù)性不佳，易受干擾；低豐度樣本（如少量腫瘤細(xì)胞）檢測受限。
2. 間接檢測法（如hTERT基因表達(dá)檢測，Biowing試劑盒為代表）
優(yōu)點(diǎn)：
操作簡便：無需蛋白提取和延伸反應(yīng)，直接檢測hTERT mRNA表達(dá)，步驟少、耗時短。
高靈敏度與穩(wěn)定性：雙色熒光TaqMan探針法特異性強(qiáng)，優(yōu)于SYBR Green；兩套檢測系統(tǒng)信號放大，靈敏度更高（尤其對低表達(dá)樣本）；結(jié)果重復(fù)性好，受樣本處理影響小。
配套完善：提供陽性和陰性對照標(biāo)準(zhǔn)品，支持定性和定量分析。
技術(shù)成熟：適用于高通量篩查。
缺點(diǎn)：
間接反映活性：依賴PCR技術(shù)，需嚴(yán)格防止RNA降解。
總結(jié)對比