結合逆轉錄酶（RTase）產品說明書
1. 檢測原理
PERT 技術：結合逆轉錄酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通過 PCR 擴增產物并實時監測熒光信號（SYBR Green 染料標記）。
特異性設計：以 MS2 RNA 為模板，通過標準曲線定量逆轉錄酶活性，間接反映樣本中逆轉錄病毒污染水平。
2. 靈敏度
檢測下限：可檢測低至 10⁻⁸ 單位 / 微升 的逆轉錄酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒顆粒關聯：約 10³ 皮單位（pU）逆轉錄酶活性 對應 70-80 個逆轉錄酶分子或 1-10 個病毒粒子。
3. 線性范圍
標準曲線：覆蓋 10⁻³ 至 10⁻⁸ 單位 / 微升（5 個數量級），適用于不同病毒污染水平的樣本。
定量準確性：通過 Log ΔRn 相對定量參數，Ct 值與逆轉錄酶濃度呈強相關性。
4. 特異性
抗干擾設計：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免細胞 DNA 污染導致的假陽性。
病毒類型覆蓋：適用于多種逆轉錄病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性檢測。
5. 準確性
內參校正：通過標準品建立的線性關系計算樣本濃度，誤差范圍小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 環境中進行，使用帶濾芯槍頭避免交叉污染。
6. 檢測限
定性檢測限：單管可檢測單個逆轉錄病毒顆粒的活性。
定量檢測限：基于熒光閾值（Ct 值）和標準曲線，實現精準定量。
7. 精密度
批內重復性：同一樣本多次檢測變異系數低（需標準化操作流程）。
批間一致性：不同批次試劑性能穩定（需參考產品說明書驗證）。
8. 操作便捷性
一步式操作：逆轉錄與 PCR 擴增在同一管內完成，減少移液步驟。
時間效率：總耗時約 3-4 小時（含孵育和 PCR 擴增）。
儀器兼容性：適配主流熒光定量 PCR 儀（如 ABI、Roche 等）。
9. 樣本類型
適用范圍：生物制品（如疫苗）、細胞培養上清液、細胞裂解液等。
特殊要求：需低溫操作（4℃）以保護酶活性，避免反復凍融。
注意事項
RNA 質量：樣本 RNA 完整性影響檢測結果，需確保 RNA 無降解。
假陽性控制：細胞 DNA 污染可能導致非特異性信號，需通過肝素抑制 DNA 聚合酶。
法規合規：符合 WHO 及《中國藥典》對生物制品逆轉錄病毒污染的檢測要求。
注：具體參數可能因試劑盒批次和實驗條件略有差異，建議嚴格按照產品說明書操作并進行預實驗驗證。
PERT 技術：結合逆轉錄酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通過 PCR 擴增產物并實時監測熒光信號（SYBR Green 染料標記）。
特異性設計：以 MS2 RNA 為模板，通過標準曲線定量逆轉錄酶活性，間接反映樣本中逆轉錄病毒污染水平。
2. 靈敏度
檢測下限：可檢測低至 10⁻⁸ 單位 / 微升 的逆轉錄酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒顆粒關聯：約 10³ 皮單位（pU）逆轉錄酶活性 對應 70-80 個逆轉錄酶分子或 1-10 個病毒粒子。
3. 線性范圍
標準曲線：覆蓋 10⁻³ 至 10⁻⁸ 單位 / 微升（5 個數量級），適用于不同病毒污染水平的樣本。
定量準確性：通過 Log ΔRn 相對定量參數，Ct 值與逆轉錄酶濃度呈強相關性。
4. 特異性
抗干擾設計：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免細胞 DNA 污染導致的假陽性。
病毒類型覆蓋：適用于多種逆轉錄病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性檢測。
5. 準確性
內參校正：通過標準品建立的線性關系計算樣本濃度，誤差范圍小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 環境中進行，使用帶濾芯槍頭避免交叉污染。
6. 檢測限
定性檢測限：單管可檢測單個逆轉錄病毒顆粒的活性。
定量檢測限：基于熒光閾值（Ct 值）和標準曲線，實現精準定量。
7. 精密度
批內重復性：同一樣本多次檢測變異系數低（需標準化操作流程）。
批間一致性：不同批次試劑性能穩定（需參考產品說明書驗證）。
8. 操作便捷性
一步式操作：逆轉錄與 PCR 擴增在同一管內完成，減少移液步驟。
時間效率：總耗時約 3-4 小時（含孵育和 PCR 擴增）。
儀器兼容性：適配主流熒光定量 PCR 儀（如 ABI、Roche 等）。
9. 樣本類型
適用范圍：生物制品（如疫苗）、細胞培養上清液、細胞裂解液等。
特殊要求：需低溫操作（4℃）以保護酶活性，避免反復凍融。
注意事項
RNA 質量：樣本 RNA 完整性影響檢測結果，需確保 RNA 無降解。
假陽性控制：細胞 DNA 污染可能導致非特異性信號，需通過肝素抑制 DNA 聚合酶。
法規合規：符合 WHO 及《中國藥典》對生物制品逆轉錄病毒污染的檢測要求。
注：具體參數可能因試劑盒批次和實驗條件略有差異，建議嚴格按照產品說明書操作并進行預實驗驗證。
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結合逆轉錄酶（RTase）
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