知識(shí)分享：Tet-on表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)

1992年Goseen等人成功的利用原核基因調(diào)控元件構(gòu)建了四環(huán)素（tetracycline,Tet）真核細(xì)胞基因調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)。目前，此系統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于基因功能和基因治療領(lǐng)域的研究。

Tet調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)通過誘導(dǎo)藥物（如Tet）改變調(diào)控蛋白的構(gòu)象，從而達(dá)到調(diào)控目標(biāo)蛋白表達(dá)的目的。

最初的Tet調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)是以大腸桿菌Tn10轉(zhuǎn)座子上Tet抗性操縱子為基礎(chǔ)而建立的。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）與Tet操縱子（Tet operator, TetO）能夠特異性結(jié)合。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)無Tet存在時(shí)，Tet會(huì)與TetO結(jié)合，從而阻斷下游抗性基因表達(dá)；當(dāng)有Tet存在時(shí)，Tet使TetR構(gòu)象發(fā)生改變，導(dǎo)致TetR與TetO分離，使下游抗性基因得以表達(dá)，細(xì)菌從而獲得耐藥性

2、Tet-on調(diào)控系統(tǒng)

利用TetR和TetO特異性結(jié)合的特點(diǎn)，多種類型的Tet調(diào)控系統(tǒng)逐漸發(fā)展起來。根據(jù)應(yīng)用最為廣泛的是Tet-on激活型系統(tǒng)。

Tet-on系統(tǒng)由調(diào)節(jié)表達(dá)載體和反應(yīng)表達(dá)載體組成。

調(diào)節(jié)表達(dá)載體包含一個(gè)人巨細(xì)胞病毒早期啟動(dòng)子（PhCMV）和反義Tet轉(zhuǎn)錄活化因子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其中rtTA由反義TetR（reverse TetR, rTetR）和單純皰疹病毒（HSV）VP16蛋白C端的一段轉(zhuǎn)錄激活區(qū)域融合而成。

反應(yīng)表達(dá)載體由Tet應(yīng)答元件（Tet-responsive element, TRE）、最小CMV啟動(dòng)子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目的基因組成。其中TRE是7個(gè)重復(fù)的TetO序列。

由于PminCMV缺少增強(qiáng)子，因此rtTA未與TRE結(jié)合時(shí)，目的基因不表達(dá)；當(dāng)rtTA與TRE結(jié)合時(shí)，VP16會(huì)使PminCMV活化從而使基因表達(dá)。

在Dox不存在時(shí)，rTetR不能與TRE結(jié)合，導(dǎo)致基因表達(dá)被抑制；而當(dāng)Dox存在時(shí)，rTetR能與TRE結(jié)合，進(jìn)而使得目的基因表達(dá)。

Tet-on調(diào)控系統(tǒng)集高效率、精準(zhǔn)、安全、可逆性四大特點(diǎn)。

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