知識分享：PLM-Puromycin試劑說明書

一、產品概述：

產品名稱: PLM-Puromycin 試劑      產品貨號：FH880802 

規格：100μl（標準規格）          濃度：1ug/ul 

推薦使用濃度：1-10 μg/ml      

有效期至：

二、產品原理：

PLM-Puromycin試劑是一種由鏈霉菌中獲取的氨基糖苷類抗生素，具有與tRNA分子3’末端類似的結構，可以和核糖體的A位點結合，從而抑制蛋白質合成對革蘭氏陽性菌產生抑制作用�？捎米骱Y選含該抗生素的基因質粒，細胞株構建，也可當做抗菌類抗生素使用。

三、儲 存：

保存條件： -20℃或4℃避光保存，盡量避免反復凍融。   

運輸條件：4℃以下低溫運輸

四、使用說明：

以驗證目的質粒是否具有Puromycin 抗性為例說明本試劑的應用：

      1.  轉染前一天鋪HEK293細胞，培養基為含10% FBS 的DMEM培養基，以6 well plate為例，細胞數目約為0.5x10⁶ cells。

      2.  在無菌管中加入目的DNA質粒（1-2 ug）及無血清的DMEM或者Opti-MEM。

3.在無菌管中加入無血清的DMEM或者Opti-MEM及本公司VGF轉染試劑4 -10 ug。

4.將2和3步中的溶液混合，室溫放置20-30min。

5.將4步所得混合液逐滴加入至6 well plate中。

6.轉染48h后，吸棄完全培養基，加入終濃度為1-10 ug/mlPLM-Puromycin試劑的完全培養基2ml。

7．再培養48h后，觀察細胞狀態，不含嘌呤霉素的細胞會飄起死亡，轉入含嘌呤霉素抗性質粒的細胞則貼壁生長。再次吸棄完全培養基，加入終濃度為1-10 ug/mlPLM-Puromycin試劑的完全培養基2ml，繼續殺死無嘌呤霉素抗性的細胞。

8.再培養48h，若細胞仍然貼壁生長且幾乎長滿，結果說明我們的目的質粒含有嘌呤霉素抗性基因，否則目的質粒不含嘌呤霉素抗性基因。

注意事項：篩選細胞時，細胞接種密度不能過大，以免影響篩選效率。當細胞密度比較大時，可加本試劑反復篩選，直至對照細胞完全死亡。建議的一般哺乳動物細胞選用的有效濃度范圍為1-10 μg/ml,使用前要做濃度篩選，選擇最佳濃度。

聲明：本試劑僅供于我公司的產品搭配使用，和其他公司產品搭配使用所產生的一切后果均與我公司無關，本產品的最終解釋權歸我公司所有。