質粒轉染試劑使用說明書
一、性能參數
產品名稱：Transfection Reagent 簡稱“TR” 產品貨號： FH880806
濃度：1μg/μl 推薦使用濃度：1μg-10μg/ml
規格：50μl （贈送） 保存條件：2-8℃ ，切勿放-20℃
有效期至： 18個月 運輸條件：常溫運輸
使用范圍：僅限科研使用，不能應用于臨床。
二、產品詳細描述
1、產品說明
TR（質粒轉染試劑）是一種多聚陽離子聚合物，具有較高的陽離子電荷密度使得聚合物網絡在任何 pH 下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞，其效果好于脂質聚酰胺，經進一步的改性后，其轉染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細胞毒性低。
2、主要特點
· 高效轉染各種貼壁細胞。
· 對懸浮細胞有很高的轉染效率。
· 在同類產品中具有較高的轉染效率和較低的毒性。
· 有無血清存在(0-20％)對轉染試劑的效果無影響。
· 可用于單個質粒或多個質粒共轉。
· 轉染24-72小時后，有高的蛋白表達量。
3、注意事項
推薦在混合前使用Opti-MEM （Cat. No. 267485)或DMEM細胞培養基(Cat. No. SH30022.01B)稀釋TR和核酸。
· 轉染過程中勿向培養基中添加抗生素，以免造成細胞死亡。
· 不同批次實驗請保持細胞接種條件相同。
· 轉染前細胞的狀態好壞對最終的轉染效果高低影響很大，請務必保證轉染前，細胞處于良好的生長狀態。
三、質粒轉染步驟
所列步驟適用于24孔板培養的哺乳動物細胞，其他培養材料，請參考表1按照轉染規模調整，所有數量和體積均是按孔計算。大部分細胞系所使用的DNA(μg)與TR(μg)的比值為1:3或1:4，轉染狀態良好的細胞可獲得高轉染效率、高表達水平和低細胞毒性。
1、貼壁細胞：轉染前一天每孔0.5-2×105個細胞接種于500μl培養基中，在轉染時細胞可長至90-95%融合。
懸浮細胞：在配制轉染液前每孔4-8×105個細胞接種于500μl培養基中。
2、轉染液制備，每孔細胞用量如下：
A. 用50μlDMEM培養基（或者其他無血清培養基）稀釋質粒DNA，輕輕混勻。
B. 取適量TR在50μl DMEM培養基中稀釋，室溫孵育5min。
C. 將前兩步所稀釋的DNA和TR 混合，輕輕混勻，室溫放置30min。
3、在每孔細胞中加入混合后的轉染液，輕輕搖勻。
4、貼壁細胞可在轉染4-6h后可更換培養基，懸浮細胞可在轉染后的18-48h之間，對細胞進行換液。轉染18-48h之后可檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達，請在轉染后24-72h收集培養液。
5、對于穩定轉染，在轉染24h后以1:10傳代培養，第二天可加入選擇培養基。
表1 各種細胞培養板轉染推薦用量
|
培養皿/板 |
表面積(cm2) |
種板密度 |
培養液 |
混合液 |
質粒 |
TR |
|
10cm |
60 |
2-3×106cell/dish |
10 ml |
2×500μl |
10μg |
30-40 μl |
|
60mm |
20 |
8-10×105cell/dish |
3 ml |
2×150μl |
3μg |
9-12 μl |
|
6孔 |
10 |
2-3×105cell/well |
2 ml |
2×100μl |
2.5μg |
7.5-10 μl |
|
12孔 |
4 |
1-3×105cell/well |
1 ml |
2×50μl |
1μg |
3-4 μl |
|
24孔 |
2 |
0.5-2×105cell/well |
0.5 ml |
2×25μl |
0.5μg |
1.5-2 μl |
|
96孔 |
0.3 |
1000-100000cell/well |
0.1 ml |
2×5μl |
0.1μg |
0.3-0.4 μl |
下圖為我司TR試劑與其他轉染試劑在不同細胞中的對比圖
左圖為我司TR轉染試劑與市面常用的知名品牌轉染試劑在轉染HEK293細胞時的對比實驗，實驗結果表明，我司TR的轉染效率要明顯超過品牌試劑轉染效率；
右圖為我司TR轉染試劑與市面常用的知名品牌轉染試劑在轉染HepG2細胞時的對比實驗，實驗結果表明，我司TR的轉染效率要明顯超過品牌試劑的轉染效率。
