免疫組化染色結果容易受哪些因素影響

     眾所周知免疫組化技術對于研究腫瘤的發展規律，進行良惡性分類及鑒別診斷具有重要的作用，因此在做此類實驗過程中一定要加倍謹慎起來，尤其是免疫組化染色實驗，其結果很容易受某些因素影響。那么，免疫組化染色結果容易受哪些因素影響？

    專家指出：免疫組化染色的結果，與組織的固定、抗原的修復、抗體的保存及使用三個重要因素相關密切。

    1、固定

    常用的組織固定液是甲醛，標本必須及時固定，這有利于抗原的保存，防止抗原在組織細胞內彌散、丟失或失去免疫活性，但固定時間最好為！“ 小時，一般不超過”# 小時，因固定時間越長，部分組織細胞免疫組化標記敏感性會明顯降低。其原因為甲醛固定過程中會形成醛鍵或羧甲基，而封閉了部分抗原決定簇；也會使蛋白與蛋 白之間發生交聯，也可能會封閉抗原決定簇，使許多抗原如常用的$%、&$‘（ 等免疫反應明顯減弱，甚至消失，致酶標不能得出正確的結果，因此在染色時為取得良好的染色效果，必須對有些抗原進行預先修復，以進一步暴露抗原。

    2、修復抗原

    外檢組織經過甲醛固定、脫水透明及浸蠟過程，組織中的抗原成分已被破壞或封閉，為了恢復組織的抗原性和提高組織對抗體的敏感性，一般需 修復抗原。有人用蛋白酶消化，或微波處理，或高壓鍋處理，使封閉的抗原成分暴露出來而顯色。我們采用高溫高壓處理切片，切片在弱酸及高溫高壓下，使封閉的抗原顯示出來，提高了陽性檢出率和陽性強度，同時減輕了背景著色，使陽性結果清晰可辨。當然，不同組織、不同抗原其所用的高壓時間及選用合適的抗原 修復緩沖液及其最適的。' 等均對結果影響甚大。

    3、正確保存及使用抗體

    抗體是免疫組織化學最基本的試劑與材料，它可分為第一抗體與第二抗體，因為抗體是蛋白質構成，保存或使用不當，不但會造成浪 費，而試劑變質會出現假陰性結果。對抗體及6、7試劑盒均應放置低溫冰箱貯存，用一支取一支，對于一次用不完的抗體可保存在# 8冰箱內，而不要放在冰格室，因為那里的溫度在+ 8以下，抗體會很快結冰，再次使用時又要溶解。這樣幾次凍融，抗體效價會急劇下降而失效。對一些將近失效期或已過失效期，有的適當提高工作濃度， 也可以作出正確的結果，以免丟失造成浪費。

    當然影響免疫組化染色的結果 ,除了以上這些，還有一些其他的因素，如載玻片需用防脫片，容器清潔處理， 以減少污染�？乖�， 抗體作用的時間也需調整，我們延長一抗作用時間，發現效果更好。冬天放置）9 8恒溫箱孵育，縮短作用時間，以及顯色時間的長短，切片厚薄都有關系。