熟地黃及其多糖中樞抑制作用研究

摘要:目的:研究熟地黃及其多糖的中樞抑制作用。方法:通過小鼠自發活動實驗、抗驚厥實驗、鎮靜催眠實驗觀察熟地黃及其多糖對中樞的抑制作用。結果:熟地黃煎液、熟地黃多糖均能夠抑制小鼠的自發活動;縮短閾下劑量戊巴比妥鈉誘導的小鼠睡眠潛伏期,延長睡眠時間;延緩異煙肼驚厥的發作潛伏期,減少動物死亡數。結論:熟地黃煎液、熟地黃多糖對中樞神經系統具有抑制作用。

 

在以往的研究中發現,地黃有一定的中樞抑制作用,但關于熟地黃的中樞抑制作用尚未見研究報道。鑒此,我們進行了熟地黃及其多糖的中樞抑制作用研究。

 

1 實驗材料

1.1 實驗藥品

熟地黃煎液:熟地黃為玄參科植物地黃Rehmanniagluti2nosa Libosch干燥根的加工品。生地黃購自原產地武陟,經中藥鑒定教研室陳隨清教授鑒定確認。參照《中國藥典》(2000年版,一部)酒燉法炮制成熟地黃。熟地黃加水煎煮,第一次加入6倍量水,煮沸1 h ,第二、三次均加入4倍量水,煮沸1 h ,合并濾液,濃縮至1∶1(1g/ ml) ,冰箱冷藏(4℃)備用,用時按需要稀釋。熟地黃多糖:熟地黃干燥品,以95 %乙醇8倍量、6倍量、6倍量依次回流提取4 h、3 h、3 h ,藥渣置通風處晾干;藥渣分別加水10倍量、8倍量、8倍量,于90℃～100℃水浴依次溫提4 h、3 h、3 h ,過濾,合并濾液,離心15 min ,得上清液,濃縮至1∶1(1g/ ml) ,用95 %乙醇調含醇量至80 % ,靜置過夜,抽濾得沉淀。取粗多糖加水溶解,加入等體積30 %三氯乙酸溶液,靜置離心,上清液用0. 01 mol/ L的氫氧化鈉調p H =7 ,減壓濃縮,濃縮液流水透析,將透析液減壓濃縮至適當體積,加入95 %乙醇調含醇量至80 % ,放置,抽濾,沉淀用無水乙醇、丙酮、無水乙醚依次洗滌,真空干燥,得粗多糖。用時按需加蒸餾水配成溶液。地西泮:購自河南中醫學院第三附屬醫院,天津制藥廠生產,批號: 0305004 ,規格: 5 mg/片。用時研成粉末,用0. 5 %CMC - Na配成藥液。

1.2 實驗動物

昆明種小鼠,豫醫動字410115 ,普通級,體重為(20±2) g,雌雄兼用,購自河南省醫學實驗動物中心。

1.3 主要儀器和試劑

小鼠自主活動測試儀:成都泰盟科技有限公司生產;戊巴比妥鈉: Serva 公司,上海化學試劑站分裝;異煙肼:上海信誼藥業有限公司生產,批號:040301 ,規格:100 mg/片。

2 實驗方法

2.1 分組與給藥

動物購入后適應性飼養2d ,隨機分為4組:對照組,地西泮組,熟地黃多糖組,熟地黃煎液組。各組給藥情況如下:對照組灌胃生理鹽水;地西泮組前4 d灌胃生理鹽水,后3 d灌胃地西泮藥2. 5 mg·kg^-1·d^-1;熟地黃多糖組前4 d灌胃生理鹽水,后3 d灌胃熟地黃多糖0. 5g·kg^-1·d^-1;熟地黃組灌胃熟地黃水煎液8g·kg^-1·d^-1給藥7 d。給藥期間小鼠自由進食飲水。

2.2 自發活動實驗

實驗于末次給藥60min后進行。用小鼠自發活動儀測定記錄各組小鼠10 min內活動次數。

2.3 閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠實驗末次給藥60 min后,各組小鼠分別腹腔注射戊巴比妥鈉(40 mg·kg- 1) 。以給藥到翻正反射消失的時間為入睡時間,即睡眠潛伏期(min) ;從翻正反射消失到恢復蘇醒的時間為睡眠持續時間(min) 。觀察記錄實驗期內小鼠的睡眠潛伏期和睡眠持續時間,觀察時間以60 min為限,超過者均以60 min計算。

2.4 異煙肼致小鼠驚厥實驗

末次給藥60 min后,各組小鼠分別腹腔注射異煙肼(300 mg·kg^-1) 。觀察記錄小鼠60 min內出現陣攣性和強直性癲癇的時間作為發作潛伏期(min) ,觀察每組動物死亡數。

 

3 實驗結果

3.1 熟地黃及其多糖對小鼠自發活動的影響與對照組比較,地西泮、熟地黃多糖可顯著地減少小鼠自主活動次數, P<0. 01 ,P<0. 05 ;熟地黃煎液有減少小鼠自主活動次數的趨勢。熟地黃多糖、熟地黃煎液與地西泮三組間比較無顯著性差異(P>0. 05) 。

3.2 對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的影響與對照組比較,地西泮顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0. 05) ,延長睡眠時間(P<0. 01) ;熟地黃多糖可顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0. 05) ,延長睡眠時間(P<0. 05) ;熟地黃可顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0. 05) 。熟地黃多糖組、熟地黃煎液組與地西泮組三者組間比較無顯著性差異(P>0. 05) 。3.3 對異煙肼致小鼠驚厥的影響與對照組比較,地西泮可顯著地延緩異煙肼驚厥發作潛伏期(P<0. 05) ;熟地黃多糖有延緩異煙肼驚厥發作潛伏期作用;熟地黃煎液可顯著地延緩異煙肼驚厥發作潛伏期(P<0. 05) ;熟地黃多糖組、熟地黃煎液組與地西泮組三者組間比較無顯著性差異(P>0.05) 。三者均能使60 min內動物死亡數減少。

 

4 小結

實驗結果表明,熟地黃煎液、熟地黃多糖均能夠抑制小鼠的自發活動;縮短閾下劑量戊巴比妥鈉誘導的小鼠睡眠潛伏期,延長睡眠時間;延緩異煙肼驚厥的發作潛伏期,減少動物死亡數。因而,熟地黃煎液、熟地黃多糖對中樞神經系統具有抑制作用,其作用機制有待進一步研究。