RAYPA培養基自動制備分裝儀在生活飲用水大腸埃希氏菌檢測中的應用

 方案摘要：本方案旨在將RAYPA培養基自動制備分裝儀應用于生活飲用水大腸埃希氏菌多管發酵法檢測流程，通過儀器實現EC-MUG培養基的自動化制備、精準分裝及一體化滅菌前處理，替代傳統手動操作。結合大腸埃希氏菌β-葡萄糖醛酸酶分解熒光底物的特性，優化實驗流程，提升檢測效率、重復性及無菌保障水平，為生活飲用水大腸埃希氏菌檢測提供高效可靠的技術方案。
 
方案詳情：
一、實驗原理
       采用總大腸菌群多管發酵法初發酵陽性的培養物作為待檢樣本，接種至經RAYPA培養基自動制備分裝儀標準化制備的EC-MUG培養基中。大腸埃希氏菌可產生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），該酶能特異性分解培養基中的熒光底物并釋放熒光產物。培養完成后，通過366nm紫外燈照射觀察熒光反應，結合陽性管數查MPN表，實現生活飲用水中大腸埃希氏菌的定性及定量檢測。RAYPA儀器的標準化制備流程可保障培養基成分均一性，有效降低底物分解效率的批次差異，提升檢測準確性。
二、實驗準備
1、培養基和試劑
① EC-MUG培養基
 
2、儀器與設備
① 紫外燈：6W，波長為366nm；
② 培養箱；
③ 電子天平；
④ 平皿：直徑9CM；
⑤ 無菌試管：約15MM×160MM；
⑥ 錐形瓶：1000ML；
⑦ 小倒管；
⑧ 接種環；
⑨ RAYPA培養基自動制備分裝儀。
 
三、實驗步驟
1、根據檢測樣本量，按EC-MUG培養基配方計算各成分用量，用電子天平精確稱量后，加入到RAYPA培養基自動制備分裝儀中，溶解攪拌后，儀器自動滅菌，定量分裝至試管中。
 
2、將接種后的EC-MUG管放入已預熱至44.5℃±0.5℃的培養箱中，密閉培養24h±2h，培養期間避免頻繁開箱，確保溫度穩定。
四、結果報告
1、培養結束后，取出EC-MUG管，在暗室或遮光條件下用366nm紫外燈照射試管側壁，觀察是否產生藍色熒光。若試管內出現明顯藍色熒光，判定為EC-MUG陽性，表明水樣中含有大腸埃希氏菌；無藍色熒光則為陰性。
2、統計所有檢測樣本中EC-MUG陽性的試管數量，根據多管發酵法對應的樣本接種量及稀釋梯度，查閱大腸埃希氏菌MPN表，計算得出水樣中大腸埃希氏菌的MPN值，檢測結果以“MPN/100mL”為單位進行報告。
3、每批次實驗需同時設置陽性對照和陰性對照，陽性對照應出現藍色熒光，陰性對照無熒光，否則實驗結果無效，需重新進行檢測。