apricot DC1自動(dòng)化液體處理工作站在qPCR 實(shí)驗(yàn)體系構(gòu)建中的應(yīng)用

引言
qPCR是一種融合了PCR擴(kuò)增與熒光檢測(cè)技術(shù)的高靈敏度方法，能夠?qū)�樣品中的DNA或cDNA進(jìn)行精確定量。該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、微生物與病原體檢測(cè)，以及NGS建庫(kù)中的文庫(kù)定量等多個(gè)科研與診斷領(lǐng)域。

qPCR技術(shù)擁有極寬的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍，其定量依賴于通過(guò)系列稀釋陽(yáng)性對(duì)照建立Ct值與對(duì)數(shù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然而，逐級(jí)稀釋對(duì)移液誤差極為敏感：即便每步誤差僅2%–3%，累積后也可能導(dǎo)致最低濃度點(diǎn)的顯著偏離，甚至使標(biāo)準(zhǔn)曲線失效。因此，高質(zhì)量的qPCR質(zhì)控必須采用高精密度和準(zhǔn)確度的移液設(shè)備或自動(dòng)化工作站。

本文展示了來(lái)自英國(guó)SPT Labtech 公司的多功能液體工作站apricot DC1的液體處理性能，并驗(yàn)證其在qPCR實(shí)驗(yàn)體系構(gòu)建中的適用性。該工作站的核心優(yōu)勢(shì)在于實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)的qPCR實(shí)驗(yàn)流程：從精準(zhǔn)分裝qPCR試劑盒中的單個(gè)試劑，到自動(dòng)完成標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作、樣品梯度稀釋和PCR反應(yīng)體系配置的整個(gè)流程。

材料與方法
液體處理
本文展示的主要液體處理步驟均在SPT Labtech公司的apricot DC1自動(dòng)化液體處理工作站上完成。該工作站是一款緊湊型臺(tái)式設(shè)備，其核心配置與特點(diǎn)如下：

• 多功能移液系統(tǒng)：配備獨(dú)特的4合1移液頭與雙分配核心，支持1/8/12通道，并可自動(dòng)更換槍頭，量程范圍： 0.5–1000 µL。

• 靈活的工作臺(tái)面：提供縱向與橫向兩種布局選擇，可分別容納最多9個(gè)和7個(gè)臺(tái)面器件，便于集成多種實(shí)驗(yàn)?zāi)�塊。

• 高耗材兼容性：廣泛兼容SBS標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的24、96、384孔板（包括深孔板與PCR板），以及1.5/2.0/5.0 mL微量離心管、PCR管與試劑槽等實(shí)驗(yàn)室常用耗材。

• 模塊化擴(kuò)展功能：支持選配溫控模塊、振蕩器與磁力架等多種功能模塊，以滿足復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)需求。

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qPCR實(shí)驗(yàn)體系配置
本次qPCR實(shí)驗(yàn)采用 TaqMan™ 基因表達(dá)預(yù)混試劑（Applied Biosystems, Cat. 4369016），以濃度為 108 ng/mL 的陽(yáng)性病毒對(duì)照作為起始樣本，在 apricot DC1 自動(dòng)化液體處理工作站上，于 96 孔 U 底板中完成陽(yáng)性對(duì)照的連續(xù)梯度稀釋。每個(gè)稀釋度設(shè) 3 個(gè)復(fù)孔。具體操作流程如下：

1. 使用 8 通道 125 μL 量程吸頭，向梯度稀釋中間板的第 2–8 列每孔加入 90 μL 稀釋緩沖液；

2. 向同一板的第 1 列加入 20 μL 陽(yáng)性對(duì)照；

3. 使用 8 通道，從第 1 列吸取 10 μL 陽(yáng)性對(duì)照轉(zhuǎn)移至第 2 列，與 90 μL 稀釋緩沖液混合，完成第一次 1:10 稀釋；

4. 依次對(duì)第 3–8 列繼續(xù)進(jìn)行 10 倍梯度稀釋，每次混勻體積為 70 μL，混勻次數(shù)為 10 次，確保均勻混合。

隨后，使用 SPT Labtech 的 dragonfly discovery 分液器，向 qPCR 檢測(cè)板（Applied Biosystems, Cat. 4306737）的第 1–8 列每孔加入 9 μL qPCR 預(yù)混試劑。將該板置于 apricot DC1 工作臺(tái)面上，由 DC1 自動(dòng)從梯度稀釋板中吸取 1 μL 樣品，轉(zhuǎn)移至 qPCR 檢測(cè)板對(duì)應(yīng)孔中。

具體實(shí)驗(yàn)流程與臺(tái)面布局見(jiàn)下圖figure 1

qPCR檢測(cè)板使用封板膜（Applied Biosystems, 4311971）密封后，置于QuantStudio 6 Flex qPCR儀（Applied Biosystems, 4485697）上進(jìn)行檢測(cè)。所用程序如下：95°C 10分鐘；隨后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95°C 15秒退火/延伸。檢測(cè)完成后，將獲得的Ct值相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照濃度的對(duì)數(shù)值繪制散點(diǎn)圖，并擬合線性回歸模型，以確定該標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率與R²值。

結(jié)論
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，配備獨(dú)特4合1移液頭的apricot DC1是實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確梯度稀釋的理想平臺(tái)。該設(shè)備支持自動(dòng)更換吸頭，有效避免了樣品在連續(xù)稀釋過(guò)程中的殘留風(fēng)險(xiǎn)。此外，apricot DC1具備多達(dá)9個(gè)擴(kuò)展臺(tái)面，并可在1、8或12通道模式間靈活切換，既能處理單一樣品分裝，也能高效完成多列連續(xù)梯度稀釋及后續(xù)qPCR反應(yīng)體系的構(gòu)建。綜上所述，apricot DC1為建立自動(dòng)化qPCR工作流程提供了一個(gè)功能靈活、操作簡(jiǎn)便且經(jīng)濟(jì)高效的整體解決方案。

DC1視頻全解析
https://v.douyin.com/TywL1yu83wg