apricot DC1自動化液體處理工作站在qPCR 實驗體系構建中的應用

引言
qPCR是一種融合了PCR擴增與熒光檢測技術的高靈敏度方法，能夠對樣品中的DNA或cDNA進行精確定量。該技術已廣泛應用于基因表達分析、微生物與病原體檢測，以及NGS建庫中的文庫定量等多個科研與診斷領域。

qPCR技術擁有極寬的動態(tài)檢測范圍，其定量依賴于通過系列稀釋陽性對照建立Ct值與對數(shù)濃度的標準曲線。然而，逐級稀釋對移液誤差極為敏感：即便每步誤差僅2%–3%，累積后也可能導致最低濃度點的顯著偏離，甚至使標準曲線失效。因此，高質量的qPCR質控必須采用高精密度和準確度的移液設備或自動化工作站。

本文展示了來自英國SPT Labtech 公司的多功能液體工作站apricot DC1的液體處理性能，并驗證其在qPCR實驗體系構建中的適用性。該工作站的核心優(yōu)勢在于實現(xiàn)了全自動的qPCR實驗流程：從精準分裝qPCR試劑盒中的單個試劑，到自動完成標準曲線的制作、樣品梯度稀釋和PCR反應體系配置的整個流程。

材料與方法
液體處理
本文展示的主要液體處理步驟均在SPT Labtech公司的apricot DC1自動化液體處理工作站上完成。該工作站是一款緊湊型臺式設備，其核心配置與特點如下：

• 多功能移液系統(tǒng)：配備獨特的4合1移液頭與雙分配核心，支持1/8/12通道，并可自動更換槍頭，量程范圍： 0.5–1000 µL。

• 靈活的工作臺面：提供縱向與橫向兩種布局選擇，可分別容納最多9個和7個臺面器件，便于集成多種實驗模塊。

• 高耗材兼容性：廣泛兼容SBS標準規(guī)格的24、96、384孔板（包括深孔板與PCR板），以及1.5/2.0/5.0 mL微量離心管、PCR管與試劑槽等實驗室常用耗材。

• 模塊化擴展功能：支持選配溫控模塊、振蕩器與磁力架等多種功能模塊，以滿足復雜的實驗需求。

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qPCR實驗體系配置
本次qPCR實驗采用 TaqMan™ 基因表達預混試劑（Applied Biosystems, Cat. 4369016），以濃度為 108 ng/mL 的陽性病毒對照作為起始樣本，在 apricot DC1 自動化液體處理工作站上，于 96 孔 U 底板中完成陽性對照的連續(xù)梯度稀釋。每個稀釋度設 3 個復孔。具體操作流程如下：

1. 使用 8 通道 125 μL 量程吸頭，向梯度稀釋中間板的第 2–8 列每孔加入 90 μL 稀釋緩沖液；

2. 向同一板的第 1 列加入 20 μL 陽性對照；

3. 使用 8 通道，從第 1 列吸取 10 μL 陽性對照轉移至第 2 列，與 90 μL 稀釋緩沖液混合，完成第一次 1:10 稀釋；

4. 依次對第 3–8 列繼續(xù)進行 10 倍梯度稀釋，每次混勻體積為 70 μL，混勻次數(shù)為 10 次，確保均勻混合。

隨后，使用 SPT Labtech 的 dragonfly discovery 分液器，向 qPCR 檢測板（Applied Biosystems, Cat. 4306737）的第 1–8 列每孔加入 9 μL qPCR 預混試劑。將該板置于 apricot DC1 工作臺面上，由 DC1 自動從梯度稀釋板中吸取 1 μL 樣品，轉移至 qPCR 檢測板對應孔中。

具體實驗流程與臺面布局見下圖figure 1

qPCR檢測板使用封板膜（Applied Biosystems, 4311971）密封后，置于QuantStudio 6 Flex qPCR儀（Applied Biosystems, 4485697）上進行檢測。所用程序如下：95°C 10分鐘；隨后進行40個循環(huán)的95°C 15秒退火/延伸。檢測完成后，將獲得的Ct值相對于陽性對照濃度的對數(shù)值繪制散點圖，并擬合線性回歸模型，以確定該標準曲線的斜率與R²值。

結論
實驗結果表明，配備獨特4合1移液頭的apricot DC1是實現(xiàn)準確梯度稀釋的理想平臺。該設備支持自動更換吸頭，有效避免了樣品在連續(xù)稀釋過程中的殘留風險。此外，apricot DC1具備多達9個擴展臺面，并可在1、8或12通道模式間靈活切換，既能處理單一樣品分裝，也能高效完成多列連續(xù)梯度稀釋及后續(xù)qPCR反應體系的構建。綜上所述，apricot DC1為建立自動化qPCR工作流程提供了一個功能靈活、操作簡便且經(jīng)濟高效的整體解決方案。

DC1視頻全解析
https://v.douyin.com/TywL1yu83wg