PROTAC明星靶點VAV1的功能及與自身免疫和慢性炎癥性疾病的關系
近年來，PROTAC在藥物研發領域迅速崛起，成為藥物開發的重要模式之一。VAV1作為一種新興靶點，是 T細胞和B細胞受體下游的關鍵信號蛋白，VAV1 的降解，導致與免疫介導病癥相關的細胞因子顯著減少，在自身免疫和慢性炎癥性疾病中的潛在治療價值備受關注。
VAV1基礎信息
VAV1（Vav鳥嘌呤核苷酸交換因子1）是一種重要的信號轉導蛋白，屬于Vav家族成員之一。VAV1主要在造血細胞中表達，包括T細胞、B細胞、單核細胞、自然殺傷細胞、粒細胞和樹突狀細胞，VAV1基因定位于人染色體7p15，包含21個外顯子。VAV1蛋白具有多結構域。
圖1 VAV1結構域示意圖
鈣調蛋白同源（CH）結構域：這個結構域參與鈣離子（Ca²⁺）的動員。鈣離子在細胞信號轉導中起著重要的調節作用，例如在免疫細胞激活過程中，鈣離子的釋放可以觸發一系列下游信號通路。
酸性（Ac）基序：哺乳動物的Vav蛋白中含有3個調節酪氨酸的基序，而果蠅中的DroVav蛋白含有1個。這些酪氨酸殘基可以通過磷酸化來調節VAV1的活性，磷酸化狀態會影響其與其他蛋白的相互作用和功能。
Dbl同源（DH）結構域：這是一個高度保守的區域，是VAV1作為Rho GTP酶的磷酸化依賴性GDP/GTP交換因子（GEF）的關鍵功能域。它能夠促進Rac/Rho GTP酶從GDP（非活性狀態）到GTP（活性狀態）的交換，從而激活Rho GTP酶。
Plekstrin同源（PH）結構域：通常PH結構域參與磷脂結合和細胞膜定位，有助于將VAV1定位到細胞膜上，從而更有效地參與信號轉導。
VAV1功能
VAV1是一種多功能域蛋白質既具有鳥嘌呤核苷酸交換因子（GEF）功能，又作為支架蛋白參與不依賴GEF的信號通路。
GEF依賴性功能
激活Rac/Rho家族GTPases：VAV1的主要GEF依賴性功能是激活Rac/Rho家族GTPases。當VAV1被酪氨酸磷酸化時，其GEF活性被激活，催化Rho GTP酶上的GDP被GTP替換，從而使Rho GTP酶從非活性狀態轉變為活性狀態。
細胞骨架重組：激活的Rac/Rho家族GTPases會引發肌動蛋白重組和F-肌動蛋白聚合，進而影響細胞的形態和運動。例如，在T細胞中，VAV1通過激活Rac1促進肌動蛋白聚合，有助于T細胞與抗原呈遞細胞（APCs）之間免疫突觸的形成。
細胞遷移與粘附：VAV1通過激活Rho GTP酶，調節整合素介導的細胞粘附激活，并參與趨化因子介導的細胞遷移。在巨噬細胞中，VAV1的活性對于CSF-1介導的趨化性和吞噬作用是必需的。
受體聚集與信號傳導：VAV1的GEF活性有助于T細胞受體（TCR）和B細胞受體（BCR）的聚集，從而增強受體介導的信號傳導。
圖2 VAV1在抗原受體信號傳導中的作用
VAV1是抗原受體信號傳導復合體的關鍵組成部分，與(A)T細胞受體(TCR)/CD3及(B)B細胞受體相關聯。在T細胞中，SLP76通過其SH2結構域被募集至T細胞跨膜活化連接蛋白(LAT)，形成的LAT/SLP76復合體作為TCR近端信號復合體中其他蛋白質（包括VAV1）的關鍵支架。VAV1通過SH2結構域和富含脯氨酸區域/SH3結構域與其他蛋白質相互作用。在B細胞中，VAV1參與的信號復合體包含與SLP76同源的支架蛋白SLP65（亦稱B細胞連接蛋白）、布魯頓酪氨酸激酶(BTK)、生長因子受體結合蛋白2(Grb2)以及磷脂酶γ(PLCγ)2。這些蛋白復合體的組裝會激活下游事件。VAV1依賴GEF的主要功能是激活Rac/Rho家族GTP酶。在T細胞和B細胞中，分別通過CD28和CD19的共刺激對于VAV1的最佳磷酸化及下游信號通路的激活至關重要。
GEF非依賴性功能
作為支架蛋白：VAV1在GEF非依賴通路中主要作為支架蛋白發揮作用。它通過各種接頭結構域與其他蛋白質結合，參與抗原受體-近端信號復合物的形成。例如，VAV1與磷脂酶C-γ（PLCγ）1相互作用，對于TCR介導的鈣離子釋放和NFAT通路的激活至關重要。
促進細胞存活和細胞周期進程：VAV1以不依賴GEF的方式促進細胞存活和細胞周期進程，從而促進DNA損傷反應。
調節氧化應激反應：VAV1還參與氧化應激反應的調節，通過其非依賴性功能影響細胞內的氧化還原平衡。
VAV1與疾病的關系
自身免疫和慢性炎癥疾病：VAV1的異常表達或功能失調與多種自身免疫病和慢性炎癥性疾病有關，如類風濕性關節炎、炎癥性腸病和銀屑病等。因此，VAV1被認為是治療這些疾病的潛在靶點。
腫瘤：在惡性腫瘤中，如乳腺癌、肺癌等，VAV1的過表達通常與腫瘤的惡性程度、轉移和預后密切相關。
隨著新型分子膠等藥物研發技術的發展，針對VAV1的干預措施顯示出治療自身免疫和慢性炎癥疾病的潛力。例如，MRT-6160作為一種VAV1靶向的分子膠降解劑，在臨床前和早期臨床研究中表現出顯著的療效。
基于TR-FRET快速的檢測介導DDB1/CRBN 復合體與VAV1相互作用的小分子
DDB1/CRBN 和 VAV1 之間的相互作用是通過使用Eu標記的抗Tag1抗體（TR-FRET 供體）和 Accepter 標記的抗 Tag2 抗體（TR-FRET受體）檢測的。由于分子膠 MRT-6160 介導了 DDB1/CRBN 與 VAV1 的相互作用，供體抗體與受體抗體接近，供體抗體的激發會觸發向受體抗體的熒光共振能量轉移（FRET），使受體抗體特異性發射665nm波長的信號。該特定信號與 MRT-6160 和 DDB1/CRBN、VAV1 的相互作用的程度成正比。該均相實驗操作簡單，無需洗滌步驟。
以下數據不能代替實驗中獲得的數據，只作為示例，結果可能因TR-FRET兼容儀器而異。
VAV1抗體
abs100534 Mouse anti-VAV1 Monoclonal Antibody(1582CT802.383.58)
TR-FRET熒光素定制標記服務，助力TR-FRET實驗開發
| 服務類目 | 原料用量 | 交付周期（天） |
| 供體/受體熒光素標記服務（小量） | 100ug | 7+ |
| 蛋白\抗體單獨標記供體熒光素或受體熒光素，100ug純化的蛋白或抗體，可做5000-10000Tests | ||
| 供體/受體熒光素標記服務（中量） | 500ug-1mg | 7+ |
| 蛋白\抗體單獨標記供體熒光素或受體熒光素，不超過1mg純化的蛋白或抗體，可做25000-50000Tests | ||
| 標記+最優配對測試 | 100ug each | 10+ |
| 將一對抗體或蛋白，分別正反向標記供體熒光素和受體熒光素（共4個標記），并進行最優配對測試 | ||
| 均相Assay開發 | - | 14+ |
| 外采蛋白原材料，進行直接或間接標記開發TR-FRET實驗，服務包含標記和實驗開發（會選擇不同的原材料和標記進行測試） | ||
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參考文獻
[1]Neurath MF, Berg LJ. VAV1 as a putative therapeutic target in autoimmune and chronic inflammatory diseases. Trends Immunol. 2024 Aug;45(8):580-596. doi: 10.1016/j.it.2024.06.004. Epub 2024 Jul 26. PMID: 39060140.
