透析胎牛血清在小分子標記實驗、細胞克隆和蛋白質(zhì)研究等領(lǐng)域的應用

眾所周知，胎牛血清是細胞培養(yǎng)界的“香餑餑”，備受胞胞們的“寵愛”，其實還有一個“香煎餅”，大家可知道？對一些細胞的特殊實驗研究，透析胎牛血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香”。

透析法處理血清是去除了分子質(zhì)量小于10kDa的小分子，避免外源小分子對細胞產(chǎn)生干擾。10kDa以下的小分子有化學小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子等。適合脈沖示蹤實驗（例如同位素標記特定小分子，并加入到培養(yǎng)體系中，以研究細胞代謝），也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應用。是研究蛋白質(zhì)組學、同位素標記、細胞信號傳導和報告基因分析、報告基因細胞系篩選的絕佳工具，接下來我們了解一下具體應用。

1、小分子標記實驗
該實驗是將用同位素標記的小分子如核苷酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞，來標記細胞內(nèi)新合成的DNA，一般培養(yǎng)一段時間，細胞中的DNA將都被同位素標記，然后進行DNA提取，純化等實驗分析。為避免胎牛血清中天然核苷酸的干擾，這時就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細胞DNA中的核苷酸均為標記核苷酸。

小分子標記實驗示例

2、陽性轉(zhuǎn)染細胞克隆的篩選
一些有基因缺陷的細胞株如CHO-DFGRˉ，缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)，必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能存活。可將我們想要表達的目的基因和DHFR基因構(gòu)建質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細胞，用不含上述添加劑的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。未轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的缺陷細胞會凋亡；成功轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的細胞會存活下來，形成細胞克隆。為避免胎牛血清中次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的干擾，這時就需要用到透析胎牛血清，以保證完全培養(yǎng)液中不含次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸。

陽性轉(zhuǎn)染細胞克隆的篩選示例

3、細胞平臺藥物篩選
細胞水平藥物篩選是更接近生理條件的一種藥物篩選模型，其模型是擬設計藥物作用的靶細胞，應用細胞培養(yǎng)技術(shù)獲取所需細胞，將這些細胞與候選化合物相互作用，通過與生化水平篩選類似的檢測技術(shù)測定化合物的作用能力，從而對化合物進行篩選。在藥物篩選過程中，未避免外源性的小分子對實驗的干擾，就需要用到透析胎牛血清。

細胞平臺藥物篩選示例

本期講解就到這里了，如有細胞培養(yǎng)問題，歡迎一起交流。

注：文中部分圖源網(wǎng)絡

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