透析胎牛血清在小分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞克隆和蛋白質(zhì)研究等領(lǐng)域的應(yīng)用

眾所周知，胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)界的“香餑餑”，備受胞胞們的“寵愛”，其實(shí)還有一個(gè)“香煎餅”，大家可知道？對(duì)一些細(xì)胞的特殊實(shí)驗(yàn)研究，透析胎牛血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香”。

透析法處理血清是去除了分子質(zhì)量小于10kDa的小分子，避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。10kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細(xì)胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子等。適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)（例如同位素標(biāo)記特定小分子，并加入到培養(yǎng)體系中，以研究細(xì)胞代謝），也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。是研究蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和報(bào)告基因分析、報(bào)告基因細(xì)胞系篩選的絕佳工具，接下來我們了解一下具體應(yīng)用。

1、小分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)
該實(shí)驗(yàn)是將用同位素標(biāo)記的小分子如核苷酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的DNA，一般培養(yǎng)一段時(shí)間，細(xì)胞中的DNA將都被同位素標(biāo)記，然后進(jìn)行DNA提取，純化等實(shí)驗(yàn)分析。為避免胎牛血清中天然核苷酸的干擾，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細(xì)胞DNA中的核苷酸均為標(biāo)記核苷酸。

小分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)示例

2、陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選
一些有基因缺陷的細(xì)胞株如CHO-DFGRˉ，缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)，必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能存活。可將我們想要表達(dá)的目的基因和DHFR基因構(gòu)建質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用不含上述添加劑的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。未轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的缺陷細(xì)胞會(huì)凋亡；成功轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)存活下來，形成細(xì)胞克隆。為避免胎牛血清中次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的干擾，這時(shí)就需要用到透析胎牛血清，以保證完全培養(yǎng)液中不含次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸。

陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選示例

3、細(xì)胞平臺(tái)藥物篩選
細(xì)胞水平藥物篩選是更接近生理?xiàng)l件的一種藥物篩選模型，其模型是擬設(shè)計(jì)藥物作用的靶細(xì)胞，應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲取所需細(xì)胞，將這些細(xì)胞與候選化合物相互作用，通過與生化水平篩選類似的檢測(cè)技術(shù)測(cè)定化合物的作用能力，從而對(duì)化合物進(jìn)行篩選。在藥物篩選過程中，未避免外源性的小分子對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，就需要用到透析胎牛血清。

細(xì)胞平臺(tái)藥物篩選示例

本期講解就到這里了，如有細(xì)胞培養(yǎng)問題，歡迎一起交流。

注：文中部分圖源網(wǎng)絡(luò)

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