霉菌與酵母菌的鑒定方法分類與操作流程

霉菌和酵母菌均屬于真菌界，但在形態、生理及生態特性上存在顯著差異。其鑒定方法結合傳統技術與現代分子生物學手段，旨在準確區分種類，尤其在醫學、食品工業和環境監測中具有重要意義。
 
一、鑒定方法分類
 
1、傳統形態學鑒定
 
霉菌：
 
菌落觀察：菌落形態（絨毛狀、棉絮狀）、顏色（如青霉的藍綠色）、邊緣特征。
 
顯微結構：菌絲分隔與否、孢子類型（分生孢子、孢囊孢子）及產孢結構（孢子囊、分生孢子梗）。
 
示例：曲霉的頂囊和分生孢子鏈，毛霉的無隔菌絲及孢囊孢子。
 
酵母菌：
 
菌落特征：光滑濕潤、多為乳白色（如釀酒酵母）。
 
顯微鏡檢：單細胞形態（橢圓形、圓形）、出芽繁殖（芽痕）、假菌絲形成（如念珠菌屬）。
 
2、生理生化特性分析
 
碳/氮源利用：API 20C系統測試糖類同化（如酵母對葡萄糖 vs. 乳糖的利用）。
 
發酵試驗：酵母的產氣能力（杜氏管觀察CO₂）。
 
溫度耐受：白色念珠菌在37℃生長良好，多數環境霉菌偏好25-30℃。
 
顯色培養基：CHROMagar™快速區分致病性念珠菌（如白色念珠菌顯綠色）。
 
3、分子生物學技術
 
靶基因測序：
 
霉菌：ITS區域（內轉錄間隔區）為主，輔以β-tubulin基因。
 
酵母菌：D1/D2區（26S rDNA）或ITS測序，如隱球菌的鑒定。
 
MALDI-TOF MS：基于蛋白質譜快速鑒定至種水平，適用于臨床酵母分離株。
 
全基因組測序：研究毒力基因或耐藥性（如耐氟康唑的假絲酵母菌）。
 
二、鑒定流程
 
1、樣本處理：無菌采集后預處理（研磨、稀釋），選擇性培養基抑制細菌（含氯霉素的SDA）。
 
2、分離培養：
 
霉菌：沙氏葡萄糖瓊脂（SDA）或馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA），25-28℃培養3-7天。
 
酵母菌：YPD培養基或麥芽汁瓊脂，30℃培養24-48小時。
 
3、初步篩選：菌落形態、顏色、氣味（如紅酵母的紅色素）。
 
4、深入鑒定：
 
形態不明確時，采用小培養（霉菌）或玉米粉瓊脂誘導酵母假菌絲。
 
生理試驗（尿素酶試驗區分新型隱球菌）。
 
分子確認：PCR擴增后測序比對GenBank數據庫。
 
三、應用與挑戰
 
1、臨床診斷：快速鑒定病原真菌（如煙曲霉、白色念珠菌）指導抗真菌治療。
 
2、工業監控：發酵過程中污染菌的檢測（如魯氏接合酵母污染果汁）。
 
3、難點：
 
雙相真菌：需在不同溫度下培養（如組織胞漿菌在37℃呈酵母相）。
 
近緣種區分：需多基因聯合分析（如曲霉屬的復合種）。
 
四、技術進展
 
1、自動化系統：VITEK 2 YST卡實現酵母快速鑒定（4-18小時）。
 
2、宏基因組學：環境樣本中直接檢測真菌群落，無需培養。
 
3、CRISPR檢測：開發特異性探針用于即時診斷（如熱帶念珠菌的快速識別）。
 
五、總結
 
霉菌與酵母菌的鑒定需綜合形態、生理及分子特征，傳統方法為基礎，分子技術提升精確度。未來趨向于高通量、自動化，以滿足臨床和環境監測的快速需求。