ArrayJet生物芯片點樣儀助力慢性淋巴細胞白血病的蛋白標志物篩選

瀏覽次數：809　發布日期：2025-6-12　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

慢性B淋巴細胞白血病（B-CLL）是最常見的血液癌癥，具有高度的基因組異質性，目前研究多集中在基因組和轉錄組水平，對蛋白質組，尤其是蛋白磷酸化修飾的功能及影響了解甚微。蛋白磷酸化是調控細胞信號的翻譯后關鍵修飾，與 CLL 的信號通路密切相關，如 B 細胞抗原受體（BCR）的 tonic 信號傳導（低水平持續激活）在 CLL 發展中起關鍵作用，涉及 LYN、SYK 等酪氨酸激酶。現有治療如 BTK 抑制劑（伊布替尼）和 BCL-2 抑制劑（維奈托克）雖有效，但存在耐藥性和自身微環境影響等問題，且缺乏早期診斷和個性化治療的生物標志物。整合蛋白質芯片和質譜等高通量篩選技術為分析蛋白質組的磷酸化提供了可能。

文章題目為“Tonic signaling of the B-cell antigen-specific receptor is a common functional hallmark in chronic lymphocytic leukemia cell phosphoproteomes at early disease stages”于2025年3月發表在Molecular Oncology雜志，作者來自于西班牙薩拉曼卡大學腫瘤研究中心。

在本研究中，19 例CLL樣患者（18 例 B-CLL 和 1 例 CLL ）為研究對象。首先采集外周血（PB），流式細胞儀純化 CD19?、CD5?的腫瘤 B 細胞，純度 > 98%，凍存于液氮中備用。隨后使用含尿素的裂解緩沖液（尿素、磷酸酶抑制劑等）裂解細胞，超聲處理后離心收集上清液，并測定蛋白濃度。通過磷酸酪氨酸抗體免疫親和法富集磷酸肽，使用質譜儀分析總蛋白和磷酸化肽段。蛋白組分析檢測到 13,504 個獨特肽段，對應 2,970 個蛋白質，其中 28 個為新發現蛋白；蛋白磷酸化分析鑒定到 594 個磷酸肽段，對應 316 個磷酸化蛋白，包括 55 個新發現磷酸肽段。英國ArrayJet生物芯片點樣儀制備蛋白質芯片，檢測磷酸化蛋白表達。將 208 種抗體（靶向 162 種蛋白）點印在氨基修飾的玻片上，隨后孵育生物素標記的蛋白以及Cy5標記的鏈霉親和素，雜交后使用熒光芯片掃描儀進行熒光信號分析。

圖1：實驗流程，從蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學分析到親和蛋白質組學（蛋白質微陣列）和WB驗證。B-CLL： b細胞慢性淋巴細胞白血病；CLL：慢性淋巴細胞白血病；ESI-HCD：高能碰撞解離的電噴霧電離；（ESI）LC-MS /MS：液相色譜串聯質譜；MBL：單克隆b細胞淋巴細胞增多癥；PTM：翻譯后修飾；WB,：western blot。

研究發現在2160個共表達蛋白中，有10%（220 個）發生了磷酸化，其主要參與 B 細胞激活和信號轉導；BCR的 tonic 信號傳導和 NF-κB/STAT3 通路是 CLL 和 MBL 磷酸化組的共同特征。55 個新磷酸肽的發現擴展了 CLL 磷酸化組數據庫，為機制研究提供了可能的潛在靶點，并發現9 個磷酸化蛋白（如 BTK、SYK）與早期疾病階段高度相關，可用于預后評估和治療監測。整合多組學技術（質譜、蛋白質篩選芯片），提供了CLL蛋白質組和磷酸化組的全景圖譜，為理解疾病異質性、開發新型生物標志物奠定了基礎。

原文鏈接：https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/1878-0261.70032

Arrayjet位于英國愛丁堡，專注于提供生物芯片應用領域的解決方案及服務。自2000年公司成立即致力于開發新型生物樣品噴點方案–噴墨式液體處理平臺，該系統于2006年上市，目前用戶遍布全球27個國家。

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