辣椒素（Capsaicin）ELISA試劑盒使用說明
辣椒及其制品辣度ELISA檢測試劑盒
使用說明書
本品采用競爭性酶免檢測技術用于辣椒及其制品辣度的定量分析，最大可滿足96次測試，在做復孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。
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產品特性：
快速（＜10min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法
檢測限1度辣度，定量限2度辣度
快速，檢測時間30min
高的重現性
原理：
基于競爭性免疫檢測原理：辣椒素與預包被在板上的辣椒素蛋白偶聯物競爭結合有限的抗辣椒素的抗體，然后加入酶結合物反應，形成酶結合物—抗辣椒素抗體—辣椒素蛋白偶聯物復合物，洗滌除去未結合的反應物，經TMB底物顯色產生藍色產物，加終止液后，產物由藍色轉變為黃色，其在450nm下有最大吸收峰。樣本中辣椒素含量與樣本的吸光度呈負相關。
原理：
基于競爭性免疫檢測原理：辣椒素與預包被在板上的辣椒素蛋白偶聯物競爭結合有限的抗辣椒素的抗體，然后加入酶結合物反應，形成酶結合物—抗辣椒素抗體—辣椒素蛋白偶聯物復合物，洗滌除去未結合的反應物，經TMB底物顯色產生藍色產物，加終止液后，產物由藍色轉變為黃色，其在450nm下有最大吸收峰。樣本中辣椒素含量與樣本的吸光度呈負相關。
使用前須知：
1. 當與儀器方法結果相比時，試劑盒的結果偏高這是很正常的現象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標分子且還能識別結構上相似的分子，包括其相關的代謝產物。因此，使用人員需要明白本產品的局限性和對數據做出合理的分析。
2. 任何試劑、檢測程序的改變都可能導致檢測失敗。
3. 不要使用超過有效期的產品；不同批次的產品不得混用。
4. 實驗用水的質量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。
5. 微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內使用完。
需要但未提供的設備和試劑：
酶標儀：配備450nm波長
單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支
多道移液器：30-300μL量程一支
白色、黃色和藍色吸頭若干 恒溫培養箱
均質器或絞肉機
甲醇，分析純
二甲基亞砜，分析純
1.樣本前處理
準備
(1) 樣本提取液
分別取甲醇70mL和二甲基亞砜 30mL混勻備用。
(2) 1×樣本稀釋液
取4×樣本稀釋液1份，加入3份去離子水混勻，比如1mL+3mL
辣椒油、火鍋底料
火鍋底料、凝固性油樣，可以加熱至樣品溶化后再稱量
(1) 稱取0.2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;
(2) 4000rpm，離心5min；
(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；
(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻
(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻
稀釋倍數：1
干辣椒
粉碎后，過40目篩
(1) 稱取0.2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;
(2) 4000rpm，離心5min；
(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；
(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻
(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻
稀釋倍數：1
新鮮辣椒以及辣椒醬等辣椒制品
在均質器或料理機上均質呈勻漿
(1) 稱取0.2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;
(2) 4000rpm，離心5min；
(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；
(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻
(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻
稀釋倍數：1
2. 檢測步驟
檢測前準備
- 所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
- 檢測開始前需準備好所需試劑；
- 取出所需體積的試劑，其余放回盒內；
- 未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
- 請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環境差異導致檢測失��；
- 標準品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應做有毒廢棄物處理。
洗液（1×）配制
取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻
檢測步驟
移取50μL辣椒素標準品至相應微孔中；
移取50μL樣本至相應微孔中；
移取50μL酶結合物至所有微孔中；
加入50μL辣椒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側混勻1min；
室溫（20-25℃）孵育20min；
甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復4次，甩干并于無塵布上拍干；
加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育10min;
加入100μL終止液，于450nm下讀數。
3. 結果計算
(1)以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進行線性擬合。
其中公式如下
a. logit(B/B0)=k ln〖(concentration)+c〗①
b. B為標準品或樣本對應的吸光度；
c. B0為零標準品對應的吸光度；
logit(B/B0)=〖ln(〗〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;
d. K為斜率；
e. C為截距
(2)計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應的稀釋倍數，即為樣本中待測物最終濃度；辣度換算公式【求得的濃度C樣，（C樣×1.142）/10，即為樣本的辣度】
標準曲線圖如右：
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