NEPA21高效基因轉染系統應用于CAR-T細胞治療

嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）指的是嵌合抗原受體T細胞通過識別某種腫瘤抗原的抗體的抗原結合部與CD3-δ鏈或FcεRIγ的胞內部分在體外偶聯為一個嵌合蛋白，通過基因轉導的方法轉染患者的T細胞，使其表達嵌合抗原受體，使得患者的T細胞被“重編碼”后，能夠生成大量腫瘤特異性的CAR-T細胞。把重新編碼后的嵌合抗原受體T細胞加進患者身體里，這種嵌合抗原受體就像GPS一樣可以特異性地追蹤和識別并引導T細胞殺傷腫瘤細胞。以CAR為基礎的細胞免疫治療是一種新的治療惡性腫瘤的模式，越來越多的臨床試驗結果證實了CAR-T細胞免疫治療的效力, 特別是血液病方面, 如白血病, 淋巴瘤。當然，在實體瘤的治療方面仍需要不斷努力。
 

2017年日本福岡大學醫學院學者 Hirotomo Shibaguchi，Naixiang  Luo，Naoto Shirasu 等發表 OncoTargets and Therapy 文章Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen，使用NEPA21進行電轉實驗。
 

文中研究表明，為了增強免疫細胞在腫瘤微環境下的抗腫瘤活性，研究者使用表達CAR的淋巴細胞結合IL-2融合蛋白，該融合蛋白含有針對癌胚抗原的單鏈片段抗體(scFv)。通過一系列對CAR進行改造，使其最有效地激活并表達INF-γ（腫瘤壞死因子）。實驗結果顯示，CAR導向的外周血單個核細胞（PBMCs）與含IL-2形成的融合蛋白的聯合治療應用，對MKN-45的抗腫瘤活性效果顯著增強。

這種新型的CAR 與由功能性細胞因子和全人類單鏈抗體組成的融合蛋白的聯合治療將可能是一種很有前途的癌癥免疫治療方法。
 

本實驗中研究者們使用了：

NEPA21 電轉系統
 

文章對比了不同電轉方式，推薦使用NEPA21 電轉系統，轉染效率高，細胞存活率好。

文中表明，“使用原代細胞核酸轉染儀(Lonza Group Ltd, Basel, Switzerland)轉染T細胞，轉染效率達到40%，但遺憾的是，在其實驗中，培養24小時后的細胞存活率為低于50％。由于我們使用原代細胞來評估單鏈抗體在CAR和融合蛋白中的聯合抗癌作用，因此在基因轉染后提高細胞存活率非常重要。”

“我們比較了2種電穿孔系統，即Nucleofector和NEPA21，其轉染效率和細胞存活率：NEPA21在人T細胞中轉染效率較高。因此，我們決定使用NEPA21轉染hCR-2基因到PBMCs。（表S 1）”
 

“通過流式細胞儀檢測EGFP的表達，在電穿孔后24小時，NEPA21轉染后PBMCs中hCR-2的表達率約為60％，細胞存活率高達95%。”
 

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NEPA21高效基因轉染系統

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NEPA21高效基因轉染系統可實現懸浮細胞、貼壁細胞、受精卵、活體動物及離體組織器官的高效轉染，包括鼠、兔、魚、爪蟾\蝌蚪、蜜蜂、蟋蟀、蠶、水蚤、渦蟲等各種活體及受精卵胚胎的轉染，還可以用于植物種子、微藻等的電轉化。配合獨有的電壓衰減（Voltage Decay）設計，在獲得高轉染效率的同時，提高細胞存活率。

每個文章背后都有一個支持者~~~
 

1、

2、
 

3、Du SH, Li Z, Chen C, Tan WK, Chi Z, Kwang TW, Xu XH, Wang S
Co-Expansion of Cytokine-Induced Killer Cells and Vγ9Vδ2 T Cells for CAR T-Cell Therapy.

4、Shibaguchi H, Luo N, Shirasu N, Kuroki M, Kuroki M
Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen.