希爾博士教程系列：如何做好文獻中的NTA粒徑濃度圖詳解

前言
Dr.Cell實驗室在檢測外泌體NTA，提供NTA鑒定報告時，經常會被問到：你們可以提供文獻中的粒徑濃度分布圖么？文獻中的粒徑濃度分布圖怎么做的？……
今天就和小希一起來Get新技能，學習怎么用Origin軟件繪制出文獻中NTA粒徑濃度分布圖！

獲得數據
Dr.Cell實驗室檢測外泌體NTA會提供完整的數據，每個樣本每檢測一次，將得到以下5個文件（每個送檢外泌體樣本Dr.Cell實驗室將至少重復檢測3次，因此一個檢測樣本會有3組NTA如下數據）。 ① 視頻文檔：記錄顆粒的布朗運動狀態
② 檢測報告：PDF文檔（詳情請查閱：NTA報告解讀說明）
③ 原始數據：記錄檢測過程中儀器的溫度、電導率等參數，以及顆粒粒徑與數量原始數據
④ 檢測說明：記錄檢測樣本池11個位點的檢測情況
⑤ 原始文件：FCS文件，可通過ZetaView軟件、流式Flowjo軟件打開

制圖
我們將用文檔③中原始數據進行作圖。
*注意.
文檔③中原始數據包含線性檢測數據與對數檢測數據！
兩組數據之間是 “-1.000000、-1.000000、-1.000000、 -1.000000”隔開！
常規取線性數據作圖，即選擇
“Size Distribution”至 “-1.000000、-1.000000、-1.000000、 -1.000000” 之間的數據！
也可直接宣傳粒徑至1000nm的數據作圖。
    直接將數據復制至Origin軟件工作表中
（例：選取至粒徑1000nm的顆粒數據）
Origin 軟件打開如下圖： ▲ Origin
將“Size / nm Number Particles / mL E+6 Volume / nm^3” 復制至Origin 軟件“Long Name”行， C列中“E+6”無意義，直接去掉。
將粒徑濃度數據（例：選取粒徑2.5nm至粒徑1002nm的顆粒數據）復制至A1單元格開始。
  選中A列（粒徑）與C列（顆粒濃度），點擊工具欄中“Plot→Line→Line”，得到粒徑濃度圖。

調整坐標
調整縱坐標，雙擊縱坐標，彈出“Y Axis”框，“Display”選擇“Scientific：1E3”
點擊“Scale”,“From”選項可以調從“0”開始，也可以不調整，此例調整為“0”。
“To” 選項調整Y軸最大值，使得峰值位于圖中的上1/3處。
“Increment”調整縱坐標單位刻度，單位刻度為“100000”。 調整后如下圖： 依次調整橫坐標，雙擊橫坐標刻度數值后，點擊“Scale”,“From”選項可以調從“0”開始，也可以不調整。

“To”選項可以調成“600-1000”，“Increment”調整縱坐標單位刻度，此例中調整為“100”。 調整后如下圖：

平滑處理
接下來，平滑處理，點擊“Analysis”→“Signal Processing” →“Smooth” →“Open Dialog” 即彈出對話框。
下一次平滑處理時可直接點擊“Analysis”→“1 Smooth” 即彈出對話框。   彈出框“Output”選項選擇“XY = input XY”, 即在原圖上直接調整。調整后如下圖：
其中“Points of Window”是調整平滑度的，一般可以不用調整，數字越大越失真。 雙擊峰圖跳出“Plot Details”可調整峰圖顏色、線條、寬度等。 完成，調整后如下圖。

原液粒徑濃度分布圖
如需要得到原液的粒徑濃度分布圖，將“Particle/mL ”數據乘以稀釋倍數，即得到原液濃度結果。
稀釋倍數見文檔中“Dilution”，或者PDF報告右上角“Dilution Factor:” ▲ PDF報告-稀釋倍數
同樣可以對比分析多個樣本的粒徑濃度分布結果，得到組合圖。
完整的操作視頻： 此次采用的是Origin軟件：OriginLab OriginPro 8.5。
軟件下載地址：關注逍鵬生物，回復：Origin
版權屬軟件注冊者所有，僅限科研試用！

Reference
Navarro Sanchez, M.E., Soulet, D., Bonnet, E.et al. Rabies Vaccine Characterization by Nanoparticle Tracking Analysis. Sci Rep 10, 8149 (2020). https://doi.org/10.1038/s41598-020-64572-6