多重熒光標記101：基本術語表

用Cell DIVE成像的胰腺癌組織切片，顯示30個生物標志物

揭秘精密系統

生物組織是多類細胞中數千種蛋白質相互作用的結果，這些蛋白質共同保障組織運行正常。多標免疫熒光成像是一種新型技術，能清晰地可視化、識別、量化多種生物標志物及其在微環境中的分布情況，以便用戶獲取更清晰的目標組織圖像（包括多類細胞及其環境）。

為便于您了解多標組織成像，我們整理了一些術語供您參考。

圖1：胰腺癌的多標組織成像分析整體解決方案顯示六輪四種生物標志物。右側為最終的多標組織成像，共顯示了24個生物標志物。

圖2：用Cell DIVE成像的胰腺癌組織切片，顯示4種生物標志物：SMAC、PCAD、ATP101和LDHA。

自發熒光

生物樣本自然發射的光。自發熒光會干擾生物標志物成像，將其去除可以提高生物標志物的信噪（自發熒光）比。去除自發熒光后，分析時只需考慮真正的陽性生物標志物即可。

 

生物標志物

一種用于指示生物來源、特定器官的存在情況，或生理條件或過程；尤其可作為評判醫療狀況（易感性）的診斷指標。

 

染料偶聯抗體

附著有熒光分子的多克隆或單克隆抗體，可用于可視化組織。

圖3：30種生物標志物的表達模型。（左）生物標志物的細胞圈選。（右）30種生物標志物的Cell DIVE圖像。

福爾馬林固定的石蠟包埋（FFPE）組織切片

FFPE是一種保存和制備活檢標本的方式。將組織樣本固定在甲醛中，以保存好組織內的蛋白質與結構。固定后，將組織嵌入石蠟，以便對組織切片并將其放上玻片。

 

免疫熒光（IF）

一種依靠抗體與其抗原相互作用的染色技術。附著熒光標記物（熒光基團）的染料偶聯抗體與其在細胞內的特異性生物分子靶點相結合，以可視化靶分子及其在樣本中的分布情況。

• 直接免疫熒光——使用可直接結合特定靶點的單一抗體。熒光基團專門與抗體偶聯。

• 間接免疫熒光——使用兩種抗體。一抗與特定靶點結合。然后，熒光基團偶聯的二抗與一抗結合，可用于檢測。

 

超多標免疫熒光成像

一種免疫熒光技術，用于可視化組織微環境中多種抗原的分布情況。使用熒光基團標記的抗體探測FFPE組織切片，然后成像，即可去除熒光信號。接下來，再用另外的抗體重新探測組織。單個圖像被分層，生成組織的完整圖像和所有已探測抗原的定位。

 

多標表型譜

每種細胞類型均表達有利于其功能的特定蛋白質。這些單獨的生物標志物全部可視化后，有助于鑒定組織微環境中的細胞，從而構建整個組織表型的完整圖像。

 

單細胞分析

在單細胞層上研究特定生物分子的存在和定位情況。單細胞分析可用于研究群體內的細胞間變異情況（如器官或組織內）。

 

空間細胞生物學/空間生物標志物分析

研究組織環境中的細胞。空間細胞生物學和生物標志物分析可用于繪制組織內細胞及其與周圍細胞的相互作用的圖像。

 

組織/腫瘤微環境

組織結構中各種細胞類型有組織的組合，通過物理、機械和生化機制影響細胞表型。全面了解腫瘤微環境有利于評估癌癥進展情況，找出治療癌癥的新療法。

 

寬場顯微鏡

常用于多標顯微鏡技術，可將整個目標標本暴露在光源之下，從而對整個視場進行成像。在多標寬場顯微鏡中，建議使用薄標本（單個細胞的厚度）進行細胞表型分析。

 

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