熒光壽命成像顯微鏡(FLIM)的首次臨床應用
（文獻部分內容摘抄）
從眼部疾病的顯微鏡到神經外科的成像，再到皮膚癌和腦腫瘤患者的斷層掃描，熒光終生成像顯微鏡是多功能的伙伴，可以與許多其他成像技術相結合，產生驚人的結果。
熒光壽命成像顯微鏡(FLIM)是在20世紀80年代后期隨著脈沖激光的發展而出現的，但直到20世紀90年代，由于引入了雙光子飛秒激光掃描顯微鏡，FLIM才得到廣泛應用。
術語 FLIM 的定義是熒光壽命成像[顯微鏡]，用空間分辨率描繪熒光壽命。FLIM圖像通常是用顯微鏡和納米鏡、內窺鏡和斷層攝影儀，但也可以在宏觀水平上獲得。
FLIM圖像通常是假彩色編碼的顏色反映值。FLIM圖像可以在頻率模式用連續或脈沖激光測量相移和解調)下拍攝，也可以在時間模式下使用時間門限相機、條紋相機和與時間有關的單光子計數(TCSPC)單元。
事實上，基于TCSPC的 FLIM 目前被用于探索最具挑戰性和令人興奮的應用之一:患者的體內臨床成像。在這種方法中，一光子激勵來自可見光譜范圍內的皮秒激光二極管，而二光子激勵則來自近紅外飛秒激光的應用。
由于關注的是測量熒光分子的熒光壽命(熒光分子處于激發態的時間)，而不是其強度，因此FLIM獨立于所有困擾傳統熒光顯微鏡技術的因素。“它獨立于實驗參數，例如照明強度、光路長度、檢測效率、散射和光漂白，”顯微鏡有限公司的產品經理說，德國人。“因此,它能夠在不同分子環境下的同一熒光物種的不同部分之間，或在發射光譜相同或重疊強烈的熒光物種類之間提供對比。除了獨立于內部儀器設置(如激光強度或檢測效率)之外，FLIME還允許使用多種類型的熒光標記同時評估不同的過程。在數據分析方面，利用熒光壽命保護技術可以很容易地去除組織自發熒光產生的任何背景輻射。
FLIM顯微鏡、斷層掃描儀和內窺鏡仍然昂貴且相對笨重，限制了它們在專業市場的應用。但隨著超緊湊、低成本的飛秒激光源在未來幾年的可用性，預測FLIM工具將變得越來越可用，臨床應用將開始出現。雖然醫學 FLIM 仍被認為是早期階段但圖像分辨率已得到發展。
將 FLIM 的光譜范圍擴展到深紫外線也非常有趣，因為許多生物分子具有天然存在的發色基團，如酪氨酸或色氨酸。“通過使用紫外激光和足夠的光學元件，人們可以利用這種天然熒光，減少用染料標記此類分子的需要，奧薩斯-穆勒說。“相對于強度隨著老化，FLIM使[用戶]能夠根據其不同貢獻來區分紫外光譜范圍內的(自動)熒光。
隨著結構的進一步改進，隨著技術方法和熒光標記(包括新型熒光蛋白)的進步，未來FLIM的細胞生物學必將有新的突破。
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