RGD環肽，AMC（香豆素）修飾多肽簡介

1. RGD環肽簡介
在了解RGD肽之前，我們先簡單介紹一下整合素，整合素即整聯蛋白，是一類介導哺乳動物細胞黏附與信號轉導的異二聚體跨膜糖蛋白受體，由α和β亞單位組成，參與包括細胞遷移、細胞侵襲、細胞和細胞間的信號傳導、細胞黏附及血管新生過程等多種細胞活動的調節，其中對整合素αvβ3的研究最為廣泛。整合素αvβ3的表達與腫瘤的遷移、血管新生、炎癥反應、骨質疏松等方面均有關。整合素在所有腫瘤組織、新生血管內皮細胞膜均有高表達，整合素的表達與腫瘤遷移、血管新生等方面有關。近來研究發現，有11種整合素能與RGD肽特異性結合，為整合素的受體拮抗多肽。所以，以RGD肽獨特的靶向作用作為治療腫瘤的新靶點成為腫瘤治療研究的一個熱點。RGD肽同時在血栓、骨組織誘導再生、抑制細胞粘附等方面有著重要的研究價值。

RGD肽分為線性RGD肽和RGD環肽兩種，相比線性RGD肽，RGD環肽有著更強的受體結合力和受體特異性，今天我們主要介紹RGD環肽的常用類型及合成方法。

提起RGD環肽，我們首先想到的，肯定是Cyclo (-RGDfK), 這是最為大家所熟識的RGD環肽，其具體信息如下：
 

三字母：	單字母：	CAS#	分子式：	分子量：	結構式：
cyclo (Arg-Ala-Asp-d-Phe-Lys)	c(RGDfK)	161552-03-0	C27H41N9O7	603.67054

但是，除了RGD環肽并非這么一個，根據成環的原理不同，可以分為以下幾個類型：

（1）. 通過二硫鍵成環的含RGD序列的環肽
因為Cys側鏈的巰基可以氧化成S-S鍵而成環，所以可以利用這個特性，將含有RGD序列的多肽成化形成RGD環肽，這類多肽通式為X1c(CRGDC)X2，其中X1, X2各為一段序列，其中的RGD通過RGD兩端的兩個C形成S-S鍵而成環，其合成思路與常規的S-S鍵氧化肽相同，都是采用固相法先將線性肽合成好，然后在液相中，利用空氣氧化法或者碘氧化法形成S-S鍵環肽。
         
（2）. 通過酰胺鍵成環的含RGD序列的環肽
最常見的cyclo (Arg-Ala-Asp-d-Phe-Lys)即是通過酰胺鍵成環來實現的，通常的做法是在G和D之間通過酰胺鍵成環。線性肽用固相合成法合成，然后在液相環境中進行環化。這種方法是利用N端氨基酸的α-氨基與C端氨基酸的α-羧基的酰胺縮合形成酰胺鍵而成環。除了這種“頭尾”氨基和羧基成環的方式外，還有：（1）側鏈與側鏈成環，即側鏈的氨基（如Lys, Orn側鏈）與側鏈的羧基（如Asp, Glu側鏈）成環；（2）側鏈羧基（如Asp, Glu側鏈）與N端氨基酸α-氨基縮合成環。
 
常見的cyclo (Arg-Ala-Asp-d-Phe-Lys)除了單純的環肽以外，因為序列中Lys側鏈有活性氨基，所以還可以通過對Lys側鏈氨基修飾而得到多種多樣的修飾cyclo (Arg-Ala-Asp-d-Phe-Lys)，比如在Lys側鏈接FTIC等熒光修飾，DOTA修飾，或者接一段肽的序列等，如Cys- (Pro)10- cyclo(RGDfK)，這些方法為RGD環肽的研究提供了多樣性選擇。

2. AMC（香豆素）修飾多肽簡介
AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)是一種應用廣泛的熒光標記，AMC標記的多肽常用途廣泛，如酶的痕量測定，酶的鑒定，激光染料的制備等，此外，C端用AMC修飾的泛素分子也是研究蛋白質泛素化過程的重要探針。

名稱：	英文名稱：	簡稱：	CAS#	分子式：	分子量：	結構式：
7-氨基-4-甲基香豆素	7-Amino-4-methylcoumarin, Coumarin 120	AMC	26093-31-2	C10H9NO2	175.18

 
AMC是一個修飾在多肽C端的熒光素，這一點與大多數熒光修飾不同。其修飾過程通常為：
(1) AMC與肽鏈C端的第一個氨基酸通過縮合反應連接；
(2) 用固相合成法合成除去C端第一個氨基酸的整條肽鏈，切割的時候用全保護的切法，切割完保留多肽側鏈及N端氨基上的所有保護基團；
(3) 用液相法將步驟(1)中的AA-AMC與步驟（2）中的全保護肽鏈進行縮合反應；
(4) 切除保護基，完成肽鏈的AMC修飾。